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酶切后纯化
用于与载体连接的pcr
酶切
产物是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,
纯化
的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR产物纯化后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
质粒
酶切
的
纯化
方式会影响连接吗
答:
需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法
纯化
,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断
酶切
实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
做完PCR和
酶切后
为什么要做
纯化
?
答:
因为你做pcr和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做
酶切后
不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
PCR产物
酶切后
需要
纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是什么呢...
答:
PCR产物
酶切后
跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
请问,您将DNA
酶切后
是用什么办法
纯化
的呢?能给下详细步骤么?
答:
如果是质粒
酶切
的话得跑胶回收 如果是片段酶切的话可以直接回收 就是用胶回收试剂盒 把你的酶切体系当成一块胶就可以了
酶切
完载体不实用回收
纯化
试剂盒,可以跑电泳图不
答:
酶切
完载体不实用回收
纯化
试剂盒,可以跑电泳图,因为这个时候的没切完载体,不使用回收,
以后
在试剂盒里面是可以二次利用的,因为酶的活性并没有完全的丧失,所以说可以跑电泳图
DNA
酶切
产物再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了?
答:
这得用物理化学知识来解释,纯的DNA
酶切
产物是带有电荷的,电泳的时候会向一个方向游动,受到水的阻力自然会变长,而不纯的时候会受到杂质的干扰不会变长,具体原因很复杂,建议你看一下物理化学有关胶体方面的书.
质粒提取与
纯化
的区别做
酶切
的质粒需要做纯化吗
答:
1.保存的
酶切
质粒是否经过
纯化
,如果经过纯化,比较容易保存 2.此酶切质粒是否经过反复冻融.如果频繁多次冻融,DNA会比较容易降解,所以建议保存的时候能够分装冻存,每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.酶切质粒的浓度,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET载体,保存在-20C半年多...
在测序前如何进行pcr产物的
酶切纯化
,注意我想知道的是用于测序的pcr产 ...
答:
一般是1ulpcr产物加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可除去多余的引物以及dNTPs,然后80度,15分钟就可以使虾碱
酶
失活。这个方法的优点是简单、快速、省钱、不损失样品,缺点是对样品要求高,如果一次
纯化
测序结果不好还要重来,费时费力。所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化,这样虽然工作量比较...
DNA
酶切
产物再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了
答:
DNA
酶切
产物再
纯化
后电泳,怎么看起来变长了 你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.你先看看这些步骤有没有需要优化:1.连接体系:粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.2.转化体系:...
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