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酶切后纯化
质粒DNA重组技术怎么操作?
答:
4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶
纯化
试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与
酶切后
回收的CAT片段混合,做连接;...
如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基...
答:
一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增。看能否出现目的基因的扩增产物。还有一种是将
纯化
的质粒进行
酶切
,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只要用这些内切酶进行酶切,然后看能否有目的基因的片段被切下来,则可以判定目的基因有没有插入...
怎么把一段2000bp且含有bamhi 和ecori
酶切
位点的dna片段克隆到一个质粒...
答:
接着利用T4 DNA连接酶将
纯化
后的线性DNA片段与线性质粒连接起来,形成一个重组质粒。最后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中并涂布于含有适当抗生素的选择平板上进行培养。通过菌落PCR等方法筛选出阳性克隆并进行测序验证其正确性。4、鉴定方法:可以采用菌落PCR、
酶切
验证及测序等方法进行鉴定是否为正确的...
如何提取细胞总DNA?
答:
经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得
纯化
的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和
酶切
、常规亚克隆及探针标记等要求,故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时,可采用氯化铯方法抽提,但该方法比较复杂,对技术要求高,花费时间长,也比较昂贵。
如何使目的基因大量表达和过量积累
答:
解决方法是回收过程动作要尽量轻柔b.如果不是基因断裂,考虑可能是回收过程中引物没有除去。如果两条带中有目的带,大可不必在意另一条带的存在4、DNA
酶切后
回收有哪些方法DNA酶切后一般不进行电泳回收,因为酶切反应体系一般比较小,且回收率比较低。为了不影响后续操作,一般的处理方法是使核酸内
切酶
失...
重组dna技术包括哪些主要步骤
答:
4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶
纯化
试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与
酶切后
回收的CAT片段混合,做连接;...
T载体如何制备
答:
我们在两个XcmⅠ之间引入HindⅢ位点有下列优点:(1)在构建pSP Teasy时提供方便;(2)经HindⅢ
酶切后
,可以防止载体中的XcmⅠ位点不完全酶切造成的自身环化;(3)两个XcmⅠ位点之间,提供保护的碱基,便于XcmⅠ酶切。用于克隆的PCR产物在连接前需经琼脂糖凝胶电泳,如条带锐利,则一般无需
纯化
即可直接用于连接...
加完loadingbuffer还能
酶切
消化吗
答:
不同的loading buffer不一样,有的含有SDS,会阻碍大部分酶的工作;有些则没有这个问题,比如有些配好的PCR套装,里面就预先加好了loading buffer,做PCR反应的时候溶液直接就是蓝色的,跑完PCR什么都不用加就能上样电泳。你要是担心,就用PCR及
酶切
产物
纯化
试剂盒纯化一下再酶切,有些品牌没有专门...
DNA指纹技术,用
酶切
成片段,所用的酶是什么酶
答:
在基因工程中使用的多数是后一类
酶
。限制酶在特定切割部位进行切割时,按照切割的方式,又可以分为错位切和平切两种。错位切一般是在两条链的不同部位切割,中间相隔几个核苷酸,切下后的两端形成一种回文式的单链末端,这个末端能与具有互补碱基的目的基因的DNA片段连结,故称为黏性末端。这种酶在基因工程中应用最多。
如何用SDS-PAGE进行目的基因优化表达检测去除上样带来的误差?_百度...
答:
b.电泳时间要尽量短,以能分离出条带为准 c.切胶时紫外线照射时间要尽量短 2、
纯化
回收PCR产物的目的是什么 a.用于后续研究,如连接克隆、表达等 b.纯化回收产物可以消除PCR反应的其它杂质,如聚合
酶
,dNTP,引物等 c.可以得到浓度较高的目的基因 3、若DNA纯化回收后的电泳结果为两条带是怎么回事...
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