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酶切后纯化
分子克隆 SDS-PAGE的问题
答:
b.电泳时间要尽量短,以能分离出条带为准 c.切胶时紫外线照射时间要尽量短 2、
纯化
回收PCR产物的目的是什么 a.用于后续研究,如连接克隆、表达等 b.纯化回收产物可以消除PCR反应的其它杂质,如聚合
酶
,dNTP,引物等 c.可以得到浓度较高的目的基因 3、若DNA纯化回收后的电泳结果为两条带是怎么回事...
关于植物油体蛋白表达
纯化
体系
答:
当oleosin-融合蛋白不具生物活性时,这一问题就更加突出,目的蛋白
酶切
、分离和
纯化
成本高,将严重影响这一体系的实际应用。(2)已知有些蛋白糖基化、酰胺化后才具有生物活性,油体表达体系中目的蛋白能否糖基化和酰胺化以及糖基化、酰胺化程度如何,还有待更多的实验研究。油体表达体系的局限性还表现在对目的蛋白的...
PCR产物用什么方法
纯化
答:
如果特异性扩增比较多,那么就割胶
纯化
。如果没有特异性扩增,只是除去杂质,那么PCR产物纯化试剂盒纯化一下。
如何在蛋白
纯化
后去除6组氨酸(6His)标签
答:
在蛋白和标签之间添加蛋白
酶切
位点,后续进行酶切去除。推荐用EK酶。可以完美切掉标签,无氨基酸残留。
乙醇沉淀法怎样
纯化
PCR产物啊?谢谢!
答:
乙醇沉淀的过程: 加入等体积的100%冷乙醇,加入1/10体积的NaAC(3M,pH5.2)后上下颠倒混匀, -20度30分钟,12000转4℃离心10分钟。倒掉上清,加入70%的冷乙醇,轻轻混匀,12000转4℃离心10分钟;倒掉上清,放在室温中干燥,标准是闻不到乙醇的味道,切记不要干燥过头。加入适当体积水或者TE缓冲液...
dna重组子的筛选鉴定有哪些步骤
答:
4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶
纯化
试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与
酶切后
回收的CAT片段混合,做连接;...
关于 碱法提取质粒后琼脂糖凝胶电泳的问题
答:
不会是整齐唯一的)。但是目前 还未见鉴定究竟是哪个正确的报道。因此么 不要追究了,除非你自己下决心把那些条带分离出来搞清楚。设计实验如下:把你认为是线性的那个条带 切胶
纯化
;单
酶切
;电泳比较,如果酶切产物很整齐单一 可以推测 原来的条带一定不是线性片段。反之若弥散拖带 则可能是线性DNA。
DNA重组技术步骤?
答:
4. 将酶切处理的后pQE-31和pUC18-CAT 质粒,分别上样跑琼脂糖凝胶电泳(注意加DNA分子量标准)。电泳结束后用DNA琼脂糖胶
纯化
试剂盒按照试剂盒说明书的方法回收DNA片段。前者回收的片段为3.5kb,后者为650bp。5. 将回收的pQE-31载体质粒均分为两份,其中一份与
酶切后
回收的CAT片段混合,做连接;...
PCR产物
纯化
后,连接载体PGMT,转化如DH5α后为何不能直接测序,还要再
酶
...
答:
你们是自己测序,还是送公司测序?如果是送公司的话,可以直接测序,测序引物为M13通用引物。但是测序之前需要把挑出来的克隆,扩繁、PCR检测后再测序。测序公司再提取质粒-测序。如果是自己测序,
酶切
应该是检测用,阳性的质粒再测序。总之,一般情况下,测序都是用质粒。酶切或者PCR只是用来检测阳性克隆,...
胶回收前所切取的胶块大小对胶回收效果有何影响?
答:
应该是两条挨得很近的条带。可能是pcr回收产物有杂带污染,跑pcr产物的时候没有分开,然后回收
纯化以后
,再跑就分开了。这个
酶切之后
跑电泳也是两条带。双酶切的话,没关系的,照样回收照样连,照样出结果。
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