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酶切后纯化
做基因多态性,PCR产物必须
纯化
后才能
酶切
吗
答:
甚至于根本就切不开,即便你隔夜酶切。 你可以自己检查一下那些用来做酶切的缓冲液(A,B,C,D,E,H,Multi-Core)之间成分的差别,和酶在各个不同缓冲液的效率的差别,你就知道缓冲液用不合适会对酶切效率有多大的影响。与其浪费内切酶和时间,何必呢,你还不如
纯化后酶切
,只...
双
酶切
的连接反应
答:
选好
酶切
位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100微升。
纯化
问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的...
DNA,
纯化
,表达,连接.
答:
5、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效,可重新连接
酶切后
的λDNA。若连接成功,则说明有效。原核表达将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白
纯化
、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点:易于生长和控制;用于细菌培养...
单
酶切
问题
答:
建议:首先电泳时要有原质粒作对照,这样你就可以确定跑得快的带是不是未完全切开的质粒了。其次想
酶切
完全,可延长梅切时间,看你的体系酶的量足够了,而且酶的量本身也不应大于1/10;只是不知梅切的时间。最后若是可以确定两条带中有一条是切开的,则可以利用胶回收
纯化
的方法得到所需的这一载体...
转化大肠杆菌之前用了PCR
纯化
,会不会有影响
答:
如果你指的是PCR产物,在
酶切
和连接之前做了
纯化
,这往往是必要的(如果条带单一,纯度好,酶切和连接体系成熟,也可以不纯化);如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2. pcr的纯化试剂盒往往是针对小片段...
pcr
纯化
试剂盒可以纯化掉
酶
吗
答:
pcr
纯化
试剂盒可以纯化掉酶 首先,采用的是质粒模板;其次,扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接
酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液,会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就...
植物基因工程实验技术-胶回收
答:
PCR后需要
酶切
时,以前常常为省略跑胶
纯化
的步骤,要在PCR产物中直接酶切,往往导致一些酶切问题,如今用这种PCR产物纯化试剂盒就不用电泳,5分钟OK了。用不着冒险直接酶切――万一酶切有问题多麻烦呀。 通常同一个品牌的PCR产纯化试剂盒和胶回收试剂盒的柱子是同样的柱子,区别是胶回收试剂盒多一个溶胶液。所以,你可...
如何对提取的DNA
纯化
答:
泳道3与泳道16加的样品是用HindⅢ
酶切
的pUC19质粒。HindⅢ酶切pUC19的结果是使超螺旋的共价闭合环状结构的pUC19质粒DNA的链断裂成线状的DNA, 线状DNA电泳速率减慢。但是实验中所用的HindⅢ没有将pUC19酶切充分,因此泳道3与泳道16电泳后会形成两条条带,其中暗带是被HindⅢ酶切的pUC19 质粒,明带是没有被HindⅢ...
如何对PCR扩增的产物进行
酶切
?
答:
1. 首先确认PCR产物,取一小部分PCR产物跑胶。2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中
纯化
DNA的试剂盒就可以)。楼上说的跑胶后再提,早就过时了。效率很低。3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶。按照平时的方法反应就可以了。4.
酶切后
再过柱...
...小箭头所指分别为限制性内
切酶
EcoRI、BamHI的
酶切
位点,ampR为青霉素...
答:
(1)由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点,所以用此
酶切割后
产生相同的黏性末端.这样,具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接,从而产生3种连接产物,目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物,所以要进行分离
纯化
.(2)由于将细胞放入含四环素的培养...
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