99问答网
所有问题
当前搜索:
酶切后纯化
我需要用三种平末端的限制性内切
酶切
割植物基因组DNA然后与接头连接,有...
答:
一般
酶切后
都要
纯化
,这样连接效率才高,很多试剂公司都专门的纯化试剂盒,回收效率高。我做过某个基因的双酶切,然后连接到载体的克隆实验。你切这个基因组这个我就不太了解
双
酶切
重组质粒后跑胶之前要
纯化
吗
答:
双
酶切之后
跑胶之前 这中间没有必要
纯化
了吧 直接胶回收就好
质粒单
酶切后
怎么抽提DNA?
答:
单
酶切
要看有几个切点,如果只有一个切点的话,可以直接纯沉或是使用PCR产物
纯化
试剂盒就可以了。如果是双切点的话,需要走琼脂糖凝胶,分离出你需要的DNA,使用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行DNA回收。
请教,关于KPn1高温灭活
纯化
和T4连接
酶
体系的生化问题
答:
自己回答:现在连接的体系应该是没什么问题,可能是双酶切的时候没有完全把位点切开,毕竟两种酶在共用buffer的情况下存在竞争,虽然之前做过交叉试验验证了可行性。目前的计划是分别单
酶切后纯化
,保证能切开。 我们采用的摩尔比是片段:载体=3:1,理论是可行的,T4 ligase的效率是可信的。总之,还要...
酶切之后
直接不做
纯化
,直接连接可以吗?
答:
不行,要去除杂质以免影响下一步的结果
从菌液提去的pet28a然后
酶切
,在与目的片段连接前需要
纯化
不,还是直接就...
答:
如果是用试剂盒提取的质粒,不需要再
纯化
。如果是双
酶切
的话,直接就可以连接。
目标片段和质粒
酶切后
连接之前需要胶回收吗
答:
需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法
纯化
,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断
酶切
实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
乙醇
纯化酶切
产物没有沉淀
答:
很正常。如果能让你看到沉淀的话,说明DNA浓度已经相当高了。或者你看到的沉淀是杂质。如果你担心这个问题,建议取一点出来电泳看就知道结果了。不会没有的
如果是载体是环形基因,PCR扩充目的基因时, 限制
酶
的切法
答:
PCR扩增目的基因时,用限制酶的切取目的基因就可。与载体没有关系。载体是在构建表达载体时才用。限制
酶切
获取目的基因,一般都用同种限制酶,从外源基因上切两刀即可获取目的基因,多位黏性末端。PCR扩充目的基因时,需要用的是引物。载体是环形基因,用同种限制酶切一刀,插入目的基因即可。
基因克隆
答:
另外,根据试剂使用中使用的酶的数量,我们将
酶切
反应可以分为单酶切、双酶切和分步酶切。 单酶切 :同一个体系进行一种酶切反应; 双酶切 :同一个体系进行两种酶的酶切反应(针对反应条件一致的限制性内切酶); 分步酶切 :样品进行完第一个酶切反应后进行
纯化
,再进行第二个酶切反应(针对反应条件不一样的限制...
<涓婁竴椤
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
酶切产物纯化浓度低
如何确定酶是否已经纯化
质粒双酶切后降解了
酶切后有多个条带