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质粒双酶切后降解了
如果
质粒
dna
双酶切
电泳后,在胶上出现1)没有条带2)一条3)两条4)三条...
答:
结合上述答案提出自己的看法:1
质粒
上
酶切
位点太多导致质粒被
降解
为小片段,电泳时跑出去了或是太小难以从电泳图上显示出来。2质粒上只有一种酶的酶切位点或是其中一种或两种酶失活或两个酶的位点非常接近(<50bp),电泳看不出,但可以通过对照质粒做参考判断,对于上述的第一、三种情况应该比目的未...
酶切
电泳条带拖尾的原因
答:
1KB的条带拖尾严重,可能是凝胶不新鲜,或者是电泳时电压过高,或者是
酶切
时间过长.上述建议中已经给出解决方法.至于你说的奇怪现象,可能
质粒
已经
降解
,也可能是酶切过久导致降解,也可能是枪头或者离心管等器材污染,总之保证一切是新鲜的,再做一次.
双酶切
的注意事项
答:
1、 做转化的时候,进行
酶
连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易
降解
.为保险起见,一般连接3小时,16度。2、 对含有AMP-RESISTENCE的
质粒
铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来.我的方法是培基高温消毒后放在烤箱里,烤箱一般温度为55-60度,然后做的时候拿出来,这样...
质粒酶切后
为什么会出现几条带?
答:
如果是
双酶切
,而且片段大小适中,可以看见酶切的片段和载体,还有未切开的
质粒
。能不能区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖凝胶的浓度,电泳时间,DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间,应当是有区别的。酶切之前就有几条带,可能是因为质粒样品中有杂带,来源于杂菌或者
降解
。
质粒双酶切
纯化产物-20存放3月还可以用吗
答:
这个由几个方面的因素决定:1.保存的
酶切质粒
是否经过纯化,如果经过纯化,比较容易保存 2.此酶切质粒是否经过反复冻融。如果频繁多次冻融,DNA会比较容易
降解
,所以建议保存的时候能够分装冻存,每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.酶切质粒的浓度,通常浓度越高,质粒也会越稳定。以前我们...
PCR产物和
质粒双酶切后
电泳如何判断酶切完成?
答:
你是不是要把
双酶切后
的
质粒
与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到的是完全酶切的产物。载体判断比较麻烦,要看载体本身、...
质粒双酶切后
怎么用酒精沉淀
答:
双酶切以后
,应该还需要用酚氯仿把酶去除掉,然后再做后面的步骤(这个和提
质粒
的沉淀步骤就是一样的):1. 1/10 体积的乙酸钠(3 mol/L ,PH=5.2)充分混匀 2. 2 倍体积冰预冷的无水乙醇,混匀,- 20℃ 15~30 分钟;3. 12,000 g X 10 min,弃上清;4. 再加1ml 70%乙醇...
质粒双酶切后
怎么会这个样子
答:
酶切后
,因为超螺旋状态的
质粒
被切成线性,所以条带会有一条条带.如果是
双酶切
,或是质粒上的酶切位点比较多的话,会有两条或更多条带.重组质粒是把载体质粒酶切开,连接上PCR片段,然后转化感受态细胞,培养后提质粒获得的,这一系列过程中都无法检测目的基因是否连接成功了,是否转化成功了,只有对...
质粒
电泳问题
答:
解决办法:1、你可以把酶切前和
酶切后
的质粒同时电泳,看看是否在酶切前那条750的片段就存在,若是,那就是质粒提取的不纯。2、不管这个750的片段是怎么来的,只要把你 的质粒再次转化后细心提取质粒,一般都会得到很纯的
质粒了
,那条750的带肯定会没有的。希望可以帮到你,祝好运!
质粒双酶切
答:
线性化的跑得最慢。
质粒酶切后
,和没有酶切的对照相比。应该会多出一条带,这条带应该是跑得最慢的,也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话,原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋,所以显的比较小:)zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是...
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