DNA酶切产物直接电泳,和酶切后再纯化然后电泳,
相比之下后者的条带明显靠后(变长了),这是怎么回事?
酶切的底物是经过试剂盒纯化的PCR产物,两头各有一酶切位点,
我尝试了“PCR及酶反应产物纯化试剂盒”和胶回收两种办法
纯化酶切产物,都是一样的效果——比不纯化直接电泳长了不少。
目标条带1kb左右,酶切前的底物~1kb,酶切后不纯化~1kb,
但是两种方式纯化以后都变成了~1.3kb。
特别是胶回收,我明明切的是1kb Marker条带边上的那条亮带
(只有一条亮带),但是胶回收以后就成了1.3kb左右???
我从来没有遇到过这种事,请问有谁知道是怎么回事?
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当然是同一块胶上面电泳——
PCR产物(稀释4倍)、PCR产物纯化、酶切产物、酶切后试剂盒纯化、酶切后胶回收纯化,
分别是大约1kb、1kb、1kb、1.3kb、1.3kb,特别是最后这个,
我切胶的时候切的就是1kb位置的条带,胶回收以后变成1.3kb