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目的片段与载体质粒连接(单酶切),电泳得到片段除目的片段外,还有一条比目的片段长的条带,求大神帮忙
如题所述
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其他回答
第1个回答 2012-10-10
质粒是环形的,单酶切后,会产生一条大的和一条小的(你的目的基因),你所看到的长条带就是酶切后剩下的大片段
第2个回答 2012-10-10
如果是平末端的话,可能出现的重复的片段连接,也可能质粒和质粒连接在了一起而目的片段插入失败
第3个回答 2012-10-10
质粒是环形的,切下一段必然会产生另一段
第4个回答 2012-10-10
说的不清楚 你电泳的是啥 单酶切后的片段?载体?载体连片段?
第5个回答 2012-10-10
擦
相似回答
对于
载体
的
单酶切和
双酶切,胶图分别会如何?为什么会这样啊?谢谢帮忙回 ...
答:
单酶切一
个电泳道上会有几个比较亮的带,而且你所根据基因大小所选择的条带内也不一定是你要的。原因是单酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼图,除了内容不同,两边完全切合。所以结合方式过多,可能性也多,如质粒
和目的
基因正确连接,质粒和目的基因反转连接,质粒
和质粒连接,目的
基因与目的基因的连...
质粒电泳
怎么看
目的质粒
的大小?
答:
一般
单酶切
之后,此时的情况类似于开环结构,显示的是整个质粒的全长,此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况 这类情况被双酶切之后,产物里面有两个片段分布,一个大片段,一个小片段,从琼脂糖凝胶电泳中看,前为小片段,后为大片段。我们再根据
目的片段和质粒
的实际长度对比切割后各自的长度...
质粒连接目的片段,
菌液pcr后
电泳
有
目的条
带,为什么送菌液测序结果是空...
答:
2、如果是克隆
,连接
T
载体
后不用
酶切,
直接转化菌落pcr检测有
目的条
带的话送样测序即可。 3、如果是做表达载体构建,pcr产物
和质粒
DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上
电泳,
如果两个酶切位点很近,几乎看不到被切下来的小
片段条
带(太小,早就跑出去了)。你要是怕酶切不完全就多稍微加点酶,...
目的
基因
酶切
后
电泳
图怎么看高中选修三的问题谢谢各位了
答:
一个大片段,一个小片段,从琼脂糖凝胶电泳中看,前为小片段,后为大片段。我们再根据
目的片段
和
质粒
的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。右侧两个为质粒对照 注意事项:1、注意调整切割时间,尽量切割完全。2、电泳时设置对照实验。3、注意单酶切和双酶切位点的区分。
单酶切
问题
答:
则可以利用胶回收纯化的方法得到所需的这一载体,在
和目的片段连接,
注意这时凝胶回收是必要的,但若两条带太相近,则可能切的时候难分离;若是改变实验条件最终完全梅切(只一条带,且和原
质粒
位置有差异),则可以用加热65度20分钟的(对于37度酶)方法将酶灭活直接用作
连接载体
即可,...
我的
目的片段连
T
载体
后转化,提
质粒,
但是提出来的东西
和
我的目的片段差...
答:
质粒
有超螺旋,环状还有复制不完全三种,可能会同时存在于大肠杆菌中,所以你所提出来的质粒直接电泳时无法判断分子量的,如果想看看是否插入成功,你可以将你的
片段酶切
下来再进行
电泳,
来证明是否有插入,才比较可行
质粒酶切
后为什么会出现几条带?
答:
如果是
单酶切,
超螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋
质粒,
因此条带会偏大,这是酶切充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;如果是双酶切,而且片段大小适中,可以看见酶切的
片段和载体,还有
未切开的质粒。能不能区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖...
空
载体质粒
转染后接菌抽提
质粒电泳
发现除了
目的条
带
外还有一
个约500bp...
答:
没有这么小的
质粒
啊,是不是抽质粒时操作失误弄断了啊
构建
载体
双
酶切电泳
后
比目的片段
pcr产物高
答:
可能是
质粒
在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.
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