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载体酶切后要纯化吗
载体
双
酶切后
用不用去磷酸化再做连接?酶切体系可以直接用作连接反应吗...
答:
不用去磷酸化咯。
酶切后一般要跑胶纯化
做完PCR和
酶切后
为什么要做
纯化
?
答:
因为你做pcr和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做
酶切后
不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
用于与
载体
连接的pcr
酶切
产物是如何
纯化
的 、、
答:
但是现在实验室一般都是用PCR产物
纯化
试剂盒,回收纯化的效果要好得多.
质粒提取与纯化的区别做
酶切
的质粒
需要
做
纯化吗
答:
1.保存的
酶切
质粒是否经过
纯化
,如果经过纯化,比较容易保存 2.此酶切质粒是否经过反复冻融.如果频繁多次冻融,DNA会比较容易降解,所以建议保存的时候能够分装冻存,每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.酶切质粒的浓度,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET
载体
,保存在-20C半年多...
酶切之后
直接不做
纯化
,直接连接可以吗?
答:
不行
,要去除杂质以免影响下一步的结果
我
需要
用三种平末端的限制性内切酶切割植物基因组DNA然后与接头连接,有...
答:
一般
酶切后
都
要纯化
,这样连接效率才高,很多试剂公司都专门的纯化试剂盒,回收效率高。我做过某个基因的双酶切,然后连接到
载体
的克隆实验。你切这个基因组这个我就不太了解
...去的pet28a然后
酶切
,在与目的片段连接前
需要纯化
不,还是直接就可以...
答:
如果是用试剂盒提取的质粒,不
需要
再
纯化
。如果是双
酶切
的话,直接就可以连接。
如果是
载体
是环形基因,PCR扩充目的基因时, 限制
酶
的切法
答:
PCR扩增目的基因时,用限制酶的切取目的基因就可。与
载体
没有关系。载体是在构建表达载体时才用。限制
酶切
获取目的基因,一般都用同种限制酶,从外源基因上切两刀即可获取目的基因,多位黏性末端。PCR扩充目的基因时,
需要
用的是引物。载体是环形基因,用同种限制酶切一刀,插入目的基因即可。
PCR产物
酶切后需要纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是什么呢...
答:
PCR产物
酶切后
跑胶,不是有你
需要
的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
酶切
完
载体
不实用回收
纯化
试剂盒,可以跑电泳图不
答:
酶切
完
载体
不实用回收
纯化
试剂盒,可以跑电泳图,因为这个时候的没切完载体,不使用回收,
以后
在试剂盒里面是可以二次利用的,因为酶的活性并没有完全的丧失,所以说可以跑电泳图
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