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酶切buffer的选择
SacI 和BamHI 双
酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用buffer2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%
。所以双酶切的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
酶切
体系对质粒DNA浓度,
buffer
缓冲液,酶量有什么要求
答:
1. **DNA浓度**:DNA浓度通常需要在合理的范围内,以确保
酶切
反应的有效性。通常来说,DNA的浓度应在25 ng/µL到500 ng/µL之间,具体要求可能会根据酶的厂家和指南有所不同。如果DNA浓度太低,酶切可能不够有效;如果太高,可能导致酶切产生太多的片段。2. **
Buffer
缓冲液**:酶...
双
酶切酶切
体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了
,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
Nhe1和EcoR1做双
酶切的
用什么
buffer
好。。
答:
这个要看是哪个公司买的
酶
,比如我买的是NEB公司的,Nhe1和Ecor1都用共同的
buffer
4,也就是随包送的smart buffer,这两种酶在buffer4里都是100%活性,所以
选用
这种。
te
buffer
对
酶切
连接有影响吗
答:
如果pH值超出这个范围,酶的活性会受到抑制或降低。此外,对于特定的限制性内切酶来说,它们在不同的pH条件下的
酶切
活性可能会有所差异。因此,在
选择
合适的缓冲液时,需要考虑到所使用的限制性
内切酶的
最佳工作pH范围。总而言之,te
buffer
对于酶切连接具有影响。通过维持适当的pH值,tebuffer可以确保酶的...
HindIII和EcoRI双
酶切
用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和HindIII双酶切用哪...
答:
推荐的是
buffer
3.1,但是这个buffer这两个酶都没带,而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右,所以
酶的
用量得增加,而且时间得加长。如果实在不行,就分别切好了。网页上表格看得比较清楚(https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE...
Takara的NheI 和BamHI双
酶切
体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何
选用
缓 ...
答:
1、如果你用的是Takara的
酶
,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的酶呢?可以用
buffer
1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
两种酶的反应缓冲液不一样,做双
酶切
时如何处理?
答:
第一个
酶切
完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
双
酶切
分步两种不同的
buffer
会相互影响吗
答:
不同公司的酶和
buffer
命名和特性是不完全一样的。像takara公司的
内切酶
有一个双
酶切的
列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer。像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了。其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料。祝你好运。
分步双
酶切
答:
不用试剂盒,也不用再次纯化pcr产物,会损失。我可以告诉你步骤:如果两种
酶的buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后...
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双酶切buffer不一样
酶切用的什么buffer
双酶切同一个buffer加多少
酶切先加酶不加buffer
takara双酶切buffer
10×什么buffer用于酶切
PCR产物酶切多久
buffer是酶吗