99问答网
所有问题
双酶切酶切体系和buffer怎么设计比较合适?
如题所述
举报该问题
推荐答案 推荐于2017-12-16
体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
当前网址:
http://99.wendadaohang.com/zd/BOeejWvWe.html
相似回答
Ecor1 和 Nco1
双酶切体系
的配制
答:
不过,对于一般的体系,可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的
buffer
,酶的总体积控制在1/10以内,比如10微升
体系酶
量不要超过1微升,20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。
Xho1和Nde1 50μl
双酶切
反应
体系
的配制
??
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内
切酶
那么
Buffer
应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer...
酶切体系
对质粒DNA浓度,
buffer
缓冲液,酶量有什么要求
答:
2. **
Buffer
缓冲液**:酶切需要在特定的缓冲液中进行,以提供适当的酶活性和稳定性。通常,酶厂家会提供特定于其酶的缓冲液。确保使用正确的缓冲液,按照厂家的建议进行配制和储存。3. **酶量**:
酶切体系
中的酶量需要根据DNA的浓度和酶的特性来确定。一般来说,您需要确保酶的活性足够高,以保证...
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的
buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul
体系
中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时
如何
处理?
答:
第一个
酶切
完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
takara公司的EcoR1和Not1 50μl
双酶切
反应
体系
的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H
Buffer
+BSA,
酶切
12小时。
若DNA需要使用两种酶进行
酶切
,应
如何
进行?
答:
如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NE
Buffer
,那就可以同时
双酶切
。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应。NEBuffer的组成及内
切酶
在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液...
在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内
切酶双酶切体系
中,反应体系是什么?或者这两种酶...
答:
你可以在内
切酶
公司网站上查到推荐的反应
体系
:从图上看,这两个酶在不能再另一个酶的推荐
buffer
中使用,只能用2X Tango buffer进行
双酶切
,而从酶活性上来看,XbaI在2X Tango中,活性50-100%,而XhoI则是100%,所以如果两个酶要调整用量的话,XbaI需要是XhoI用量的2倍,但就是酶总量不能超过总...
双酶切
的20μL反应
体系和
反应时间
如何
确定
?最
好是说明原理。所用的...
答:
酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查
双酶切buffer
表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应
体系
中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
大家正在搜
双酶切体系buffer表
双酶切用什么buffer
neb酶切buffer
双酶切buffer对应表
双酶切buffer通用表
赛默飞双酶切buffer图
neb的酶和buffer用量
takara酶切buffer
takara酶切buffer表
相关问题
两种酶的反应缓冲液不一样,做双酶切时如何处理?
我是新手,要做Xbal和XhoI双酶切实验,想请问一下buf...
进行质粒双酶切时,两种酶同时加效果好,还是两种酶分开加效果好...
20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别
SacI 和BamHI 双酶切 用什么buffer
双酶切的问题
Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制??
酶切技术的技术问题