若DNA需要使用两种酶进行酶切,应如何进行？

如题所述

推荐答案 2012-06-09

如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer，那就可以同时双酶切。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始，酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求，然后加入第二种酶完成双酶切反应。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。

温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考

当前网址：http://99.wendadaohang.com/zd/ezBWzXeXt.html

其他回答

第1个回答 2012-06-19

可以在同一个反应体系中进行双酶切或者先一个酶切后纯化再使用另外一个酶酶切。

第2个回答 2012-06-13

建议你参考Takle参考书，每个生物实验室都必备的，是否能够同步酶切，同步酶切的最佳缓冲液是什么，所需酶切温度和时间等，都要查找清楚

相似回答

基因工程里,用两种不同的限制酶一起切割质粒和含目的基因的DNA,可以防止...答：取下一段目的基因要切两次，也就是说这里切的两次可以分两种不同的酶来切，同样的，载体也需要切两次同样也是用这两种酶来切，这样有两组碱基的互补配对，就可以避免载体和载体配对以及目的基因和目的基因配对。（不太确定啊。。。）

DNA酶应激法的原理答：这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓冲液进行双酶切。

两种酶的反应缓冲液不一样,做双酶切时如何处理?答：如果是分开酶切的话，第一个酶切完成后要回收（可用醇回收，效率比较高）后，再进行第二次酶切。做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时，16度；对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来...

构建重组表达质粒前,还需要将空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切...答：是的，在构建重组表达质粒之前，通常需要对空表达载体和重组克隆质粒进行双酶切。双酶切是指使用两种限制性内切酶对DNA进行切割，以产生互补的黏性末端或平滑末端。这样可以将重组克隆质粒的目标片段与空表达载体进行连接，形成重组表达质粒。具体操作步骤如下：1. 选择适当的限制性内切酶，确定其酶切位点。...

生物问题:关于基因工程?答：具体分析如下：要获取目的基因，要在目的基因的两端切割，两端分别有限制酶1和限制酶2的切点，那么我们用两种不同的限制酶切割，这样目的基因的两端就会有不同的末端，就不会出现目的基因的环化。如果目的基因的两端都有限制酶1的切点，你可以只用一种限制酶1切割，这样目的基因两侧的末端相同，会出现目的...

双酶切的连接反应答：1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，如BamHI，HindIII，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。双酶切...

双酶切的问题答：实在没有很好的通用buffer，那么你需要延长酶切时间。用单酶切不是不可以，但质粒自连的可能性会很大，这种情况下，你可以用碱性磷酸酶处理后再进行连接，但自连可能性还是有的。醇沉法就是加入两倍体积的乙醇，然后在－20或者-70中放置15-30min，接着进行短暂低速离心（1-2Min,5000 rpm左右），弃...

DNA双酶切的条件是什么答：适宜温度、PH，当然还有被切的原料

限制性酶酶切DNA有几种方式答：大致有三种 I型限制酶在识别位点1Kb处随机性进行切割，且识别位点非特异 II型内切酶特异性识别旋转对称序列，且在特定位置进行切割 III型内切酶识别特异序列，在识别序列下游24-26bp处进行切割（非特异）

大家正在搜

在DNA的酶切反应系统中各种酶的酶切位点 DNA酶切与检测 DNA酶切与连接检测基因文库用什么酶切酶切酶连限制性酶切酶限制酶的酶切序列酶切反应