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双酶切体系buffer表
HindIII和EcoRI
双酶切
用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和HindIII双酶切用哪...
答:
推荐的是
buffer
3.1,但是这个buffer这两个
酶
都没带,而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右,所以酶的用量得增加,而且时间得加长。如果实在不行,就分别切好了。网页上表格看得比较清楚(https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE-...
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用buffer2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%
。所以双酶切的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
Hind III 和Sal I
双酶切
反应
体系
答:
以20微升
体系
为例 方法一
Buffer
Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好 ...
双酶切
的20μL反应
体系
和反应时间如何确定?最好是说明原理。所用的...
答:
buffer 去Takara产品目录查
双酶切buffer表
,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应
体系
中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
第一个
酶切
完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
双酶切酶切体系
和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系
不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切
1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
质粒
双酶切
时使用的是不同公司的酶,不知
buffer
如何加?是两种buffer都...
答:
不知
Takara的NheI 和BamHI
双酶切体系表
中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
1、如果你用的是Takara的
酶
,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的酶呢?可以用
buffer
1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
Xbal和XhoI
双酶切
的共用
Buffer
是什么?Fermentas公司的酶!
答:
登录到fermentas的网站上最上方,在tool部分有一个Doubledigest的工具,点击点击进去以后,把你要切的两个
酶
勾上,提交,就会给出相应的
buffer
的建议。We recommend:
Buffer
2X Tango™2-fold excess of XbaI XhoI Incubate at 37°C 而且还可以看到每一种酶在此buffer中的活性,由于XbaI在2XTango...
Xho1和Nde1 50μl
双酶切
反应
体系
的配制??
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么
Buffer
应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer...
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