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双酶切buffer不一样
双酶切
分步两种
不同
的
buffer
会相互影响吗
答:
不同
公司的酶和
buffer
命名和特性是不完全
一样
的。像takara公司的内切酶有一个
双酶切
的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer。像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了。其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料。祝你好运。
我想做
双酶切
,但是这两种酶是
不同
公司的,一个takara一个NEB,有没有什...
答:
分开,因为
buffer不同
。可以先用效率高的
酶切
,回收后再用效率低的酶切,再回收,用于后续实验。
用fermentas的Kpn
1
和bamH1做
双酶切
,用的
buffer
是
Buffer
bamH1,做了...
答:
质粒自连说明双酶切没有切开。不知道你的buffer是怎么选的,
如果两种酶在buffer中的活性不同的话,活性较低的那个可以加大酶量
,同时延长酶切时间,或者更换buffer。条件需要自己摸索。
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
楼主你用的是哪家公司的酶?NEB的话,BamHI是用buffer2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是
buffer1
,4,酶活性是100%。所以
双酶切
的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在
不同buffer
中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
双酶切
的问题
答:
而造成这种情况,一般都是通用
buffer
没有选好,所以你要看两种内切酶的说明书,选择一种两种酶都具有很好活性的buffer进行酶切。实在没有很好的通用buffer,那么你需要延长酶切时间。用单
酶切不
是不可以,但质粒自连的可能性会很大,这种情况下,你可以用碱性磷酸酶处理后再进行连接,但自连可能性还是有...
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
回答:体系不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切1
ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
Ecor1 和 Nco
1双酶切
体系的配制
答:
你用的是哪个公司的
酶
? 不同公司的
buffer不一样
的。不过,对于一般的体系,可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的buffer,酶的总体积控制在1/10以内,比如10微升体系酶量不要超过1微升,20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切1
ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的
buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
请教高手10*
buffer
,2*buffer,
1
*buffer是什么意思啊?
双酶切
时他们之间...
答:
10*的就是十倍浓度的 比如说你要配50ul体系 那就加5ul的10*
buffer
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10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
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