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takara双酶切buffer
takara
公司的EcoR1和Not1 50μl
双酶切
反应体系的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H
Buffer
+BSA,
酶切
12小时。
Takara
的NheI 和BamHI
双酶切
体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
1、如果你用的是
Takara
的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的酶呢?可以用
buffer
1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
...如何确定?最好是说明原理。所用的
酶
都是
Takara
公司的
答:
buffer 去
Takara
产品目录查
双酶切buffer
表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
BamHI NdeI
双酶切
用哪种缓冲液
答:
TaKaRa
的酶的话,用K
buffer
。
我想做
双酶切
,但是这两种酶是不同公司的,一个
takara
一个NEB,有没有什...
答:
分开,因为
buffer
不同。可以先用效率高的
酶切
,回收后再用效率低的酶切,再回收,用于后续实验。
用
TaKaRa
的Bln1和Sal1做
双酶切
,用的M
buffer
答:
嗯,需要分开
酶切
Xho1和Nde1 50μl
双酶切
反应体系的配制??
答:
由这两种酶组成的
双酶切
体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用
TaKaRa
的限制性内切酶那么
Buffer
应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer...
neb
buffer
2可以用
takara
的什么buffer代替
答:
不同公司的酶和
buffer
命名和特性是不完全一样的。像
takara
公司的内切酶有一个
双酶切
的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer。像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了。其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料。祝你好运。
NotI和SalI可不可以
双酶切
答:
可以的啊!
takara
的酶可以用
buffer
H做公用buffer,而NEB的酶notI-HF 和salI-HF 可以用buffer 4做为公用buffer。还有要注意你的两个
酶切
位点之间有没有保护碱基,如果没有:那还是要分步切的,否则切不开。
...I 与Fermentas的BstBI的
双酶切
?如何选择
buffer
?如何进行分步酶切...
答:
怎么是两个不同公司的呢。。。分步
酶切
吧。。。比如先用
Takara
的体系BamHI 先切一下,我一般过夜酶切,然后酚-氯仿抽一下DNA,然后再用Fermentas的体系 BstBI切过夜。。。
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