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酶切buffer的选择
酶切
体系中各物质neb 酶 缓冲液
buffer的
作用?
答:
1. NEB 酶为限制性
内切酶
,对目的片段特异性序列进行识别与
酶切
;2.
Buffer的
作用是维持反应体系的酸碱度的稳定。
若DNA需要使用两种酶进行
酶切
,应如何进行?
答:
如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer,那就可以同时双
酶切
。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应。NE
Buffer的
组成及
内切酶
在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液...
酶切的
步骤
答:
一、实验材料准备1. 材料:质粒DNA。2. 试剂:限制性
内切酶
、ddH2O。3 . 仪器:微量移液枪,离心机,水浴锅, 电泳仪,紫外透射观测仪。二、单
酶切
1. 在1.5 mL灭菌离心管中依次加入:(1)质粒DNA:X μL(约1 μg)。(2)限制性内切酶:1 μL(约10 U)。(3)10×
buffer
:2 μL...
进行质粒双
酶切
时,两种酶同时加效果好,还是两种酶分开加效果好?谢谢...
答:
看是哪两种酶。如果两种酶在同一种buffer里的
酶切
效率都不错,那就同时加;如果很难找到一种同时合适两种
酶的buffer
,就只能分开加。
DNA限制
酶切
和琼脂糖凝胶电泳中常说的Marker是什么?还有Loading Dye 在...
答:
DNA的限制性
酶切
限制性
内切酶
特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上,并在此处切割双链DNA。loading
buffer 的
中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,...
双
酶切的
问题
答:
解决这个问题的方法就是加大原始酶切反应体系中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量。接着,还有一种可能就是两种
酶的酶切
效率相差甚远,一种酶活性非常好,一种酶则活性很弱,这样就会产生看不到酶切片段的情况。而造成这种情况,一般都是通用
buffer
没有选好,所以你要看两种
内切酶的
说明书,
选择
一种...
如何
选择
lysis
buffer
?
答:
lysis
buffer
是一个很大很宽泛的概念,它并不特指某种固定的溶液配方,而是要根据你的实验目的有针对性地
选择
和调整。比如提质粒、提RNA、纯化蛋白、分 离细胞器等,需要用到不同配方的lysis buffer。另外,不同的细胞类型,如动物细胞、真菌细胞或细菌细胞,裂解时所用的lysis buffer也各自不同,甚至...
如何让电泳图谱的结果清晰,
酶切
前后差异明显
答:
首先你要保证质粒的浓度,太高了不行,
酶切
不完全会出现多条带,太低了,那就得不到结果清晰的效果,通常浓度100ng/ul 的质粒 我做20ul酶切体系:水15ul
buffer
2ul 质粒2ul 酶1ul 这样切出来的效果还是挺好的,其次你要保证你切的东西跑胶出来的片段大小相差不能太小,比如你要...
...的EcorI和Hind3是否可以进行双
酶切
,加什么
buffer
怎么查啊?能说的...
答:
可以啊 都是HF的用
BUFFER
4 不然的话用2 NEB网站看一下不就行了
用TaKaRa的Bln1和Sal1做双
酶切
,用的M
buffer
答:
嗯,需要分开
酶切
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