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双酶切对应buffer
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用
buffer
2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%。所以
双酶切
的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
回答:体系不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切
1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切
1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
BamHI NdeI
双酶切
用哪种缓冲液
答:
TaKaRa的酶的话,用K
buffer
。
Xbal和XhoI
双酶切
的共用
Buffer
是什么?Fermentas公司的酶!
答:
登录到fermentas的网站上最上方,在tool部分有一个Doubledigest的工具,点击点击进去以后,把你要切的两个
酶
勾上,提交,就会给出相应的
buffer
的建议。We recommend:
Buffer
2X Tango™2-fold excess of XbaI XhoI Incubate at 37°C 而且还可以看到每一种酶在此buffer中的活性,由于XbaI在2XTango...
用fermentas的Kpn1和bamH1做
双酶切
,用的
buffer
是
Buffer
bamH1,做了...
答:
质粒自连说明
双酶切
没有切开。不知道你的
buffer
是怎么选的,如果两种酶在buffer中的活性不同的话,活性较低的那个可以加大酶量,同时延长酶切时间,或者更换buffer。条件需要自己摸索。
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的
buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
如果是分开
酶切
的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来...
...现在想用20微升体系,关键是
BUFFER
的浓度,谢谢大家
答:
buffer
量是
酶
量的2倍,按比例增加或减少
HindIII和EcoRI
双酶切
用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和HindIII双酶切用哪...
答:
推荐的是
buffer
3.1,但是这个buffer这两个
酶
都没带,而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右,所以酶的用量得增加,而且时间得加长。如果实在不行,就分别切好了。网页上表格看得比较清楚(https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE...
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