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线状质粒能否表达,是不是质粒酶切后一定要再连接,上面的抗生素标记才会表达?
如题所述
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推荐答案 2011-06-04
线状DNA可以表达,但是线状DNA稳定性差
另外如果质粒不成环的话,没法复制,因为质粒复制是从ORI(复制起始位点)开始滚环复制的,不成环的话到了断口就停下了。不能复制的质粒,没法随细菌分裂而扩增,这样细菌分裂几代以后质粒就丢光了,也就不存在什么抗性了。
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其他回答
第1个回答 2011-06-04
线状质粒不能表达,是一定要连接后上面的抗生素基因才会表达……
相似回答
【求助/交流】请教
质粒
线性化是指什么意思
答:
fungixx(站内联系TA)你可以同时做一个对照 使用你的酶之外的另一种容易切割的酶和这种酶进行双酶切,这样就能判断是否完全切割吧liu2007(站内联系TA)单
酶切后,
因为单酶切
的质粒
为线状构象,而没切开的质粒为环状,电泳能完全分开这两种构象,再回收线性化的条带用于转化就可以了。也可以取少许酶切...
...只要
质粒
上含有
抗生素
基因就能在抗生素培养液中生存,如果没
表达
呢...
答:
所以只要菌体内有这种带上了抗
抗生素
基因的质粒,菌就可以抵抗抗生素对它的毒杀作用,就可以生存。我们是将目的基因在
质粒的
多克隆位点(MCS)处
连接,
成为重组
质粒,质粒
上要有相应
的标记
基因以方便筛选转化子,一般就是用抗生素抗性基因,在含有抗生素的选择培养基中培养菌体就可筛选出成功导入质粒的菌落。
质粒
双
酶切后
怎么会这个样子
答:
会有两条或更多条带.重组质粒是把载体
质粒酶切
开
,连接
上PCR片段,然后转化感受态细胞,培养后提质粒获得的,这一系列过程中都无法检测目的基因
是否连接
成功了
,是否
转化成功了,只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。测序是更准确的方法,一般不用而已。
两个
酶切后是不是
只有目的基因与
质粒
连,也就是不用再筛选了?
答:
非也!目的与目的连
,质粒
与质粒连的情况同样会发生。
一定要
筛选!
质粒酶切后
为什么会出现几条带?
答:
如果是单
酶切,
超螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋
质粒,
因此条带会偏大,这
是酶切
充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;如果是双酶切,而且片段大小适中,可以看见
酶切的
片段和载体,还有未切开的质粒。
能不能
区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖...
质粒酶切
答:
应该能的,没有
酶切的
载体有很大一部分是超螺旋的,会跑得比本来的大小快
,酶切
结束后就线性化了。你在做连接时加一个只加载体不加insert的对照,如果对照不长的话证明载体切得没问题。你就多做几个载体和Insert的比例,4度连接过夜
,一定
能长。另外,insert可以多加一点 ...
近期在
质粒
构建是PCR和
酶切后
都有目的条带,但是就
是连接
转化后没有点...
答:
看看
酶是否
有问题,感受态是否有问题
,抗生素是否
有问题,等等 按你给的线索,菌落很少,很有可能是切开的线性质粒没有连上片段,转不进细胞,少量没有切开的空载体转进细胞,形成阴性菌落。问题可能在片段酶切上,建议连T载体
再切,
或双酶切换成两步单
酶切,
或换酶切位点,或重新设计保护碱基 ...
表达质粒
和目的片段双
酶切后,
一直连
不
上,为什么
答:
是不是表达质粒
内部有双
酶切的酶切
位点,这样质粒就会被切成多段,无法跟目的片段组成环状结构。
高中生物:为什么受体细胞中原来没有
标记
基因?
答:
人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、
抗生素
耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind ...
大家正在搜
质没有酶切的质粒只有一条带
质粒酶切后会出现几条带
标准质粒酶切后有三个条带
质粒酶切后没有条带了
质粒酶切三条带的原因
质粒双酶切后降解了
质粒单酶切三条带
酶切质粒载体
质粒酶切时间
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