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质粒酶切时间
tarkara
酶切质粒时间
答:
tarkara酶切质粒时间是四个小时
。酶切是根据酶切样品的量跟酶切体系中酶的活性来确定的,是酶切PCR产物的话,跟你所加的保护碱基数目也是有关的。做酶切的时候加的酶都是过量的,切三四个小时,保证获得足够干净的载体,切载体时间太短的话,载体不容易纯化掉,就会混入到你的连接产物中影响连接效率...
酶切质粒
时,怎样鉴定质粒是否被切开了啊?
答:
回答:根据说明书,确定酶切条件,温度,
时间一般是2到3个小时
,或者难切一点的过夜完后加入loadingbuffer,跑琼脂糖凝胶电泳,一般分以下几个孔,marker ,原始质粒, 一个酶单切,另一个单切, 两个酶双切单切的两个条带一样大小,但是比原始质粒跑的慢双切的如果有连入片段,就会是两条带,一小一大如果没...
质粒酶切
鉴定时应注意哪些事项
答:
2.酶的浓度控制在总体系的5%~10%左右,太高的酶浓度会让保存酶的甘油浓度过高而产生星号活性。体系20-50ul即可。
酶切37℃,时间3-4h就可以
,当然过夜也行。3.可以用空载质粒作为对照组。如果还有其他的疑问,欢迎追问~
质粒
DNA与限制
酶
在37°C下水浴2h,质粒DNA会不会变成线性?
答:
在做酶切鉴定时,
1小时或甚至半小时都可以鉴定
。要做连接时,会长一点,上午切着,下午或晚上回收做连接。其实,质粒的酶切反应的效率还是比较高,
至少90%的质粒在一小时内都被切开了
。而pcr产物因为识别位点短在两端,才需要长时间或过夜酶切。如果你不放心,可以仔细看看酶的说明书,心中就有数了,...
细胞核
酶切
转速
答:
10000r/min。由于
质粒
DNA的质量小,酶切量大,使得细胞核在控制自身
酶切时间
上比较严格,细胞核的自身酶切时间是在每秒一百个,这就要细胞核有快读的酶切转速,所以酶切转速达到了惊人的最高转速10000r/min,只有这养样,才能完成生命的基本实现过程。
质粒
DNA的保存条件?
答:
要常用的时候放在4℃就可以了。我的经验是放1个月都可以
酶切
的。长期放的话就-20℃冻存即可,可以放半年,做PCR没问题。
不记得
酶切
到底能不能16度过夜了,怎么破
答:
酶切
要看用什么酶,一般是30度和37度酶切过夜(片段)或者酶切8小时(
质粒
).您问的4度过夜的情况是不是连接?T4酶可以4度连接过夜,效果和16度一样好,但需要注意酶切缓冲液的配比和种类以及是否需要加BSA.
质粒
上有BamHI,SalI 2个
酶切
位点,可以用BamHI,SalI双酶切过夜吗
答:
。。。酶切的
时间
最好看看你所使用的酶的说明书,上面会有推荐的用法和使用的时间,这两种酶所使用的缓冲液也要考虑到。当然,一般说明书喜欢吹吹牛皮,你最好问一下同实验室有经验的人员。一般
酶切质粒
会比较好切,基本都不用过夜酶切,切得时间过长会有星号活性。
shRNA实验步骤
答:
AgeI HF+ EcoRI HF酶切pLKO.1载体
质粒
,体系如下:37°C孵育1.5h。(
酶切时间
可延长到>2h)琼脂糖凝胶电泳,可见1kb和7kb两个条带,切胶回收7kb条带(靠凹槽的那条)。 Run digested DNA on 0.8% low melting point agarose gel until you can distinctly see 2 bands, one 7kb and ...
酶切片段的
时间
与
酶切质粒
的时间一样吗,或是短些还是长些?
答:
质粒
为双螺旋结构,当然比片段难切了,一般
酶
用量是片段的2-10倍,
时间
也要加长。
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