99问答网
所有问题
当前搜索:
蓝白斑筛选概念
为什么dna重组只
筛选
出白菌落
答:
你是用
蓝白斑筛选
体系吗?一般白斑表示有目的基因插入lacZ,破坏其功能,而不能正常合成酶降解底物,从而不出现蓝斑。因此重组的载体一般LacZ的活性已被破坏,产生白斑,但是有时你插入的目的基因短,使得LacZ基因没有完全破坏的话,可能会出现淡蓝的斑。
抗生素的
蓝白斑
插入失活
筛选
的原理。
答:
可使菌落或噬菌斑呈兰色 你的空载提转进去的话,IPTG诱导lacZ' 表达α肽,互补体内缺陷的酶,然后可降解底物X-gal,产生蓝斑;如果你则载体的多克隆位点插入了片段,导致编码的α肽错误,或者不能编码α肽,也就不能产生正常功能的酶,无法分解X-gal,所以长
白斑
。
t克隆时
蓝白斑筛选
实验为什么蓝斑做菌落pcr也能扩出来
答:
除非你的片段很长. 6:
蓝白斑筛选
:有可能淡蓝色的蓝斑是你需要的克隆,如果你的克隆浅蓝色的斑很多,更可能是这样.一般效率高的话只有少于10%的蓝斑,效率一般则可能超过半数蓝斑甚至更多. 7:生长速度:关于生长速度你的
概念
是错误的,数百道数千bp的插入克隆生长速度不会差太多,不可以此作为依据.即使...
为何
蓝白斑筛选
后要菌液pcr?
答:
为了确认在
白斑
里面确实是插入了目标片段。因为有的时候,可能插入的是非特异片段,所以筛完再确认一下。不然其他片段插进去,也是白斑,后续做实验就白做了。当然菌液PCR也不是最准确的,最后还是需要测序的。
为什么在抗性板上长出的转化子或经
蓝白斑筛选
的转化子还需要进行进一步...
答:
为什么再好卡信访上张错的总华资河金廊为防摔洗的转化,只好写进一步的
筛选
,因为这是员工唱的正规,这是一个常规。
IPTG用来
筛选蓝白斑
需要搭配什么使用啊,求告知啊,做了几次实验都失败...
答:
因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样就能完美实现
蓝白斑
的
筛选
了。根据我们实验的经验IPTG浓度可以控制在50mg/ml;X-gal浓度20mg/ml较好,我们学校做实验是用的武汉双金的,用的很稳定,不过X-gal对光是敏感的,你做好基板之后要尽快的使用。
筛选
阳性转化子,为什么会出现假阳性现象
答:
1.
蓝白斑筛选
中,白斑是插入外源片段的2.菌落pcr假阳性的产生有很多原因:a引物设计特异性不好b挑取菌落的时候非单克隆c可能沾到未分解的外源片段(菌液pcr要比菌落pcr靠谱一些)
蓝白斑筛选
培养基怎么配啊?新手
答:
载体pGEMZ在β-半乳糖苷酶(lacZ)的α-肽编码区内具有多克隆区域。在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色
筛选
鉴别。不带 有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含 lacZ基因的α...
比较
蓝白斑筛选
法与插入失活法筛选的优缺点
答:
插入失活法在含抗性培养基中培养后并不能直接得到所需的重组体。而是需要进行菌落平板的影印复制, 才能够将所需的重组体挑选出来。
蓝白斑筛选
可以直接通过颜色判断抗性培养基中的所需重组体,并且两种抗性可以在同一培养基中同时筛选,大大提高了效率。蓝白斑筛选的所需工程菌为β半乳糖苷酶缺陷型菌株。
...导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取
白斑
还是蓝班...
答:
这属于
蓝白斑筛选
挑白斑 野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。编辑本段适用方面 设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的...
<涓婁竴椤
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜