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为什么在抗性板上长出的转化子或经蓝白斑筛选的转化子还需要进行进一步的筛选?
如题所述
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第1个回答 2020-06-20
为什么再好卡信访上张错的总华资河金廊为防摔洗的转化,只好写进一步的筛选,因为这是员工唱的正规,这是一个常规。
第2个回答 2020-06-20
因为每次都我都要一遍一遍地去精细的才能出来,真的。
第3个回答 2020-06-20
抗性版长出转化子或经蓝白斑筛选的转化子需要进化的。
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如何用抗生素插入失活法和IacZ基因插入失活法
筛选转化子?
答:
因此通过蓝白斑就能大致确定重组转化子
。 抗生素插入失活法就是抗生素基因上插入外源DNA片段,重组质粒中抗生素抗性基因被破坏,不能抗相应的抗生素不能生长。因此将转化子复制在有无相应抗生素的平板上,通过菌落能否生长就能大致确定重组转化子,即不能生长的为重组转化子。
简述
蓝白斑筛选的
原理
答:
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法,是根据载体的遗传特征筛选重组子,主要为基因互补与抗生素基因
。蓝白斑筛选在指示培养基上,未转化质粒的菌落因无抗生素抗性而不能生长,重组质粒的菌落是白色的,非重组质粒的菌落是蓝色的,以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法 。
抗性板上长的
菌落有哪些情况
答:
蓝色菌落、白色菌落。
1、蓝色菌落:蓝白斑筛选,空载体转化菌落在IPTG/xgal抗性平板上出来蓝色菌落,阳性菌落呈白色
。2、在抗性板同时添加了iptg和xgal,长出来的几乎都是白菌落。
如何获得含有目的基因的重组质粒
转化子
答:
进行纯化。用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化,于体外使两者相连接,转化后,
利用蓝白斑筛选原理对重组质粒转化子进行挑选
。基因是产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。
重组子的重组子 - 重组子
的筛选
答:
这种重组子
的筛选
,又称为
蓝白斑筛选
。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落。 这和受体菌:质粒DNA的选择相关, 原则上要注意: 1、 受体菌必须是限制与修饰系统缺陷的菌株; 2、 根据质粒基因型和受体菌基因型互补原则而定; 重组...
标记基因作为重组DNA载体的重要标记的问题
答:
在基因工程中当然会出现外源DNA没有整合到质粒上的现象。受体是否具有青霉素抗性只能证明受体细胞获得了质粒,至于是有没有连接上外源DNA片段的质粒则是一般不知道的。因此一般使用双选法。即有一个标记基因是抗性基因,另一个基因常用的是lacZ基因。这样通过
蓝白斑筛选
可获得转入了重组质粒的细胞。
蓝白斑筛选
适用方面
答:
蓝白斑筛选
通常结合
抗性筛选进行
,以增加
筛选的
准确性。在含有X-gal和抗生素的平板上,未
转化的
菌不具有抗性,无法生长;空载体转化的菌表现为蓝色,表明未成功重组;而目的重组菌因为α互补作用被阻断,表现为白色菌落,说明已成功
筛选出
目标基因的插入。这种筛选技术在基因工程实验中扮演了重要角色,帮助...
大肠杆菌
的转化
原理及方法
答:
6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl,分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。7. 如果载体和宿主菌适合
蓝白斑筛选的
话,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。8. 在涂好...
...T载体并转化大肠杆菌,如何鉴定并获得真实
转化子?
答:
你这个实验应该是从转化以后再开始的吧,制备蓝白
筛选的
平板,一般的T载体我们都会选择氨苄抗性的板子来涂平板,因为氨苄的比卡那的板子好长,因为你是PCR扩增
出来的
,所以推荐你使用大号的平板以获取更多的菌落,将IPTG(1mol/L浓度)取4-8微升,取用二甲基甲酰胺溶解的浓度为100微摩尔每升的X-Gal,...
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