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蓝白斑筛选概念
蓝白斑筛选
中,蓝斑和白斑菌落中的质粒有何差异?
答:
蓝斑菌落的质粒上半乳糖苷酶基因没有被插入失活,
白斑
的则插入失活。
蓝白斑筛选
假阴性
答:
然而当外源DNA 插入质粒位于α-肽编码序列中的多克隆位点时,由于破坏了α-肽的阅读框架,因而不能表达出与宿主菌基因组表达的缺陷型β-半乳糖苷酶多肽发生α-互补。由于没有β-半乳糖苷酶的酶解作用,致使重组菌形成白色菌落。由此,可以借助
蓝白斑
很容易
筛选
出重组子.不过实际操作中发现当插入小片段时...
看
蓝白斑筛选
,LacZ基因能编码肽链与β-半乳糖苷酶缺陷型菌株互补,共 ...
答:
转化到β-半乳糖苷酶缺陷型菌株中,赋予该菌株表达β-半乳糖苷酶(互补),从而作用于底物X-gal生成蓝色物质。如果是β-半乳糖苷酶菌株,则不转化外源质粒,就全部长成蓝斑了。LacZ被插入片段阻断之后,即使该质粒转化β-半乳糖苷酶缺陷型菌株,也不能表达完整的β-半乳糖苷酶,所以呈
白斑
。
蓝白斑筛选
重组子时什么被用作诱导剂什么被用作显色剂
答:
诱导载体上的LacZ基因表达。
蓝白斑筛选
重组子时诱导载体上的LacZ基因表达被用作诱导剂什么被用作显色剂,蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。
...大虾帮帮忙,选择什么酶切位点和如何
筛选
重组的载体?
答:
蓝白斑筛选
不需要基因插入LAC-Z处,你也插不进去,在克隆位点(各种内切酶的位点)插入就可以达到筛选的目的了,你仔细看一下蓝白斑筛选的原理就知道了。我手头上只有pGEX3和5的载体的资料,但是估计跟4是差不多的。GST区域在那些克隆位点的上游。不知道你说的鉴定是什么意思?是用GST上的引物进行PCR...
最近做基因克隆,做
蓝白斑筛选
时只有白斑,一个蓝斑也没有,而且白斑长的...
答:
你应该先检查一下实验所用的药品、菌体、载体、感受态细胞的活性,有时也会出现失效的时候
pET28b能不能进行
蓝白斑筛选
答:
不能,因为没有lacZ的alpha片段编码基因。大多数表达载体为了高效表达目的蛋白,会避免插入其它不是必需的编码序列。参考资料:http://baike.baidu.com/view/161221.htm
TA克隆
蓝白斑筛选
答:
1、可能你的感受态细胞都死亡了,根本就没有活菌,就不长了。2、可能是没连接上,没有就没有完整的载体转入感受态细胞,自然也不会生长。3、可能用的抗生素不对,抗生素与耐药载体不符合,也不会生长。4、抗生素量太大,培养是时间太短,细菌还没有长起来。5、涂布时,玻璃棒太热,把细菌都烧死了。
蓝白斑筛选
没有白斑
答:
说明你重组质粒连接效率低或者自连严重。还有可能是你的插入片段太短,并且刚好和lacZ使用同一个读码框,造成半乳糖甘酶具有部分活性。是的。我建议你重做一次连接和转化。注意使用的双酶切,并且内切酶不要是同尾酶。
为何
蓝白斑筛选
后要菌液pcr?
答:
因为
白斑
不一定是阳性克隆,而且你做ta克隆是为了测序,送的样最好是验证过的。当然测不出来是不收费的
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