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lacz基因蓝白斑筛选原理
蓝白斑筛选的
蓝白斑筛选原理
答:
α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样,
lacZ基因
在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。
蓝白斑筛选
的
原理
是什么?
答:
由α-互补而产生的
LacZ
+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为
蓝白斑筛选
。
蓝白斑筛选
的
原理
是什么
答:
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法
。野生型大肠杆菌(E.Coli)产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后,突变型大肠杆菌的β半...
蓝白斑筛选
答:
这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的
β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补
。蓝白斑筛选的机理 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别,它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝...
简述α互补和
蓝白斑筛选
的
原理
答:
在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色
筛选
鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含
lacZ基因
的α-肽互补细菌,具有β-半乳糖苷酶的ω片段,所得功能β-半乳糖苷酶(α...
蓝白斑筛选
答:
用于
蓝白斑筛选
的载体具有一段称为
lacz
'的
基因
,lacz'中包括:一段β-半乳糖苷酶的启动子;编码α肽链的区段;一个多克隆位点(MCS)。MCS位于编码α肽链的区段中,是外源DNA的选择性插入位点。虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶,但当菌体中含有带lacz'的质粒后,质粒lacz'基因...
有没有高人能告诉我
蓝白斑筛
的步骤,
原理
。谢谢。 有加分
答:
1.将目的
基因
插入
LacZ
'靠近5‘端有多克隆位点,是否成功插入有待
蓝白斑筛选
鉴定。2.通过一定的方法,如CaCl2诱导法将目的基因转入宿主菌(失去正常氨基端(5'端)的B-半乳糖苷酶的一种突变体)3.将宿主菌至于含有IPTG,Xgal,以及抗生素Amp固体培养基中培养 4.形成白色菌斑,说明目的基因插入了多克隆...
在含有x-gal 和iptg 的
筛选
培养基上,为什么会长出蓝色菌落,和白色菌 ...
答:
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法:
是根据载体的遗传特征筛选重组子
,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数...
看
蓝白斑筛选
,
LacZ基因
能编码肽链与β-半乳糖苷酶缺陷型菌株互补,共 ...
答:
LacZ
是转化的质粒携带的
基因
,转化到β-半乳糖苷酶缺陷型菌株中,赋予该菌株表达β-半乳糖苷酶(互补),从而作用于底物X-gal生成蓝色物质。如果是β-半乳糖苷酶菌株,则不转化外源质粒,就全部长成蓝斑了。LacZ被插入片段阻断之后,即使该质粒转化β-半乳糖苷酶缺陷型菌株,也不能表达完整的β-半乳糖...
蓝白斑筛选
中的蓝斑是什么? 是载体自连产物吗?
答:
载体上的是β-半乳糖苷酶
基因
(
lacZ
),他能使细菌表达β-半乳糖苷酶,该酶可以将X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖)降解,产生显色底物,然后我们就能看到蓝色斑。
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