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lacz基因蓝白斑筛选原理
许多大肠杆菌的质粒上含有
lacz基因
答:
31.(8分)许多大肠杆菌的质粒上含有
lacZ
’
基因
,其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG 存在下,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该
原理
从导入质粒的受体细胞中
筛选
出真正导入重组质粒的细胞,过程如下图。请据图回答:(1)基因工程中,构建基因表达载体的目的...
蓝白斑筛选
重组子时什么被用作诱导剂什么被用作显色剂
答:
诱导载体上的
LacZ基因
表达。
蓝白斑筛选
重组子时诱导载体上的LacZ基因表达被用作诱导剂什么被用作显色剂,蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。
分子生物学,名词解释
答:
亮氨酸拉链(leucine zipper):出现在DNA结合蛋白质和其它蛋白质中的一种结构基元(motif)。当来自同一个或不同多肽链的两个两用性的α-螺旋的疏水面(常常含有亮氨酸残基)相互作用形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链
蓝白斑筛选
是一种
基因
工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生...
蓝白斑筛选
结果相反是为什么
答:
前面那是是假阴性,由于插入目的片段太短,报道称有30%的假阴性,但为什么会有60bp的小片段,多数是实验过程中的污染,也有可能是
基因
组被酶切的小片段。后者是假阳性,即在载体与插入片段连接前,载体末端被核酸酶酶切掉一点,被轻微降解的载体然后自连接,被轻微降解的
lacZ
‘基因就足以产生白色菌落了。
蓝白斑筛选
重组质粒实验中为什么用IPTG做为诱导物
答:
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有
lacZ 基因
载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
阿儿法互补中为什么去除
lacZ基因
的11到41bp?前140bp不能随便剔除吗...
答:
首先不是bp,而是氨基酸。其次前140bp随便剔除您是在哪儿看的?α互补中,缺失11-41氨基酸后得到的是缺陷型的β-半乳糖苷酶,叫做M15多肽;加入携带lacHindII片段的M13噬菌体载体,就可以发生α互补,使β-半乳糖苷酶重新具有活性。用于做
蓝白斑筛选
~~参考资料:吴乃虎老师的《
基因
工程
原理
》上册 ...
pET28b能不能进行
蓝白斑筛选
答:
不能,因为没有
lacZ
的alpha片段编码
基因
。大多数表达载体为了高效表达目的蛋白,会避免插入其它不是必需的编码序列。参考资料:http://baike.baidu.com/view/161221.htm
空载T19转进感受态中,
蓝白斑筛选
为什么显示蓝色菌落?
答:
空载就不会有插入片段呀,
lacZ基因
就没有断开呀,所以肯定是蓝斑
如何把导入了目的
基因
的受体细胞
筛选
出来?
答:
导入时用的运载体上如果有抗性
基因
(标记基因),就可以通过检测抗性基因的表达来检测,比如运载体PBR322 就带有抗四环素基因和抗氨卞青霉素基因 要么就等目的基因在受体细胞中表达以后,然后根据特定的性状来区分
将目的
基因
插入质粒的某基因中这个基因还能否表达?
答:
这种质粒一般是测序质粒之类的载体吧?如果是这样的话这个问题可以用
蓝白斑筛选
作为参考。质粒上包含
LacZ
的alpha片段编码序列及其相关启动子,多克隆位点设计在启动子或者编码区或者它们之间,当没有外源序列的时候,该质粒转入△M15的大肠杆菌中,在IPTG诱导下,大肠杆菌表达omega片段,与质粒表达alpha片段构成...
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