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lacz基因蓝白斑筛选原理
蓝白斑筛选
中的蓝斑是什么? 是载体自连产物吗?
答:
载体上的是β-半乳糖苷酶
基因
(
lacZ
),他能使细菌表达β-半乳糖苷酶,该酶可以将X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖)降解,产生显色底物,然后我们就能看到蓝色斑。
在含有x-gal 和iptg 的
筛选
培养基上,为什么会长出蓝色菌落,和白色菌 ...
答:
这个是
蓝白斑筛选
试验。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素
基因
等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(
lacZ
)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并...
看
蓝白斑筛选
,
LacZ基因
能编码肽链与β-半乳糖苷酶缺陷型菌株互补,共 ...
答:
转化到β-半乳糖苷酶缺陷型菌株中,赋予该菌株表达β-半乳糖苷酶(互补),从而作用于底物X-gal生成蓝色物质。如果是β-半乳糖苷酶菌株,则不转化外源质粒,就全部长成蓝斑了。
LacZ
被插入片段阻断之后,即使该质粒转化β-半乳糖苷酶缺陷型菌株,也不能表达完整的β-半乳糖苷酶,所以呈
白斑
。
蓝白斑筛选
培养基怎么配啊?新手
答:
载体pGEMZ在β-半乳糖苷酶(lacZ)的α-肽编码区内具有多克隆区域。在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色
筛选
鉴别。不带 有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含
lacZ基因
的α...
分子生物学,名词解释
答:
亮氨酸拉链(leucine zipper):出现在DNA结合蛋白质和其它蛋白质中的一种结构基元(motif)。当来自同一个或不同多肽链的两个两用性的α-螺旋的疏水面(常常含有亮氨酸残基)相互作用形成一个圈对圈的二聚体结构时就形成了亮氨酸拉链
蓝白斑筛选
是一种
基因
工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生...
蓝白斑筛选
结果相反是为什么
答:
前面那是是假阴性,由于插入目的片段太短,报道称有30%的假阴性,但为什么会有60bp的小片段,多数是实验过程中的污染,也有可能是
基因
组被酶切的小片段。后者是假阳性,即在载体与插入片段连接前,载体末端被核酸酶酶切掉一点,被轻微降解的载体然后自连接,被轻微降解的
lacZ
‘基因就足以产生白色菌落了。
蓝白斑筛选
重组质粒实验中为什么用IPTG做为诱导物
答:
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有
lacZ 基因
载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
空载T19转进感受态中,
蓝白斑筛选
为什么显示蓝色菌落?
答:
空载就不会有插入片段呀,
lacZ基因
就没有断开呀,所以肯定是蓝斑
如何把导入了目的
基因
的受体细胞
筛选
出来?
答:
导入时用的运载体上如果有抗性
基因
(标记基因),就可以通过检测抗性基因的表达来检测,比如运载体PBR322 就带有抗四环素基因和抗氨卞青霉素基因 要么就等目的基因在受体细胞中表达以后,然后根据特定的性状来区分
...同时在培养基中表达,怎样区分和
筛选
出目的
基因
?
答:
只要用这些内切酶进行酶切,然后看能否有目的基因的片段被切下来,则可以判定目的基因有没有插入。另外,在有些载体中(如T载体)目的基因是插入在某些标记基因内部的,这样如果标记基因表达正常则没有插入,如果标记基因不表达,那么则正常插入了。如T载体中的
LacZ基因
。
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