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质粒提取中大肠杆菌的要求
关于酵母
质粒
转化
大肠杆菌
答:
(5)6,000 r/min离心5 min收集菌体,用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次
;(6)离心收集菌体,加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体,取200μL的菌悬液至1.5 mL 离心管中;(7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段,轻轻混匀后冰浴 10 min;(8)将冰浴后...
植物基因工程实验技术-
提取质粒
答:
1. 接种新鲜的单个菌落到 1-5 mL LB 培养基(含适量抗生素), 37℃震荡培养 14-16 h
。 注:不建议培养时间超过 16 h,可能会导致大肠杆菌裂解从而降低质粒 产量。➡️大肠杆菌分大摇小摇,挑单的菌需先小摇后大摇 或接 1%-5% 含质粒的大肠杆菌细胞液体于 LB培养基。Q如果摇...
质粒转化
大肠杆菌质粒
浓度
答:
1、首先制备含有Amp抗生素的LB平板,终浓度为50。2、其次取一个1.5ml离心管,加入100感受态细胞悬液,置冰上加入20ul
质粒
T+G,用移液器轻柔混匀,静止20分钟。3、最后加入液体培养基使细菌恢复正常,静置12-16个小时即可。
将
质粒
转化入
大肠杆菌
怎么保存
答:
如果想保存质粒的话建议保存菌种的同时提取质粒保存于负二十度
;保藏已转入质粒的大肠杆菌,短期几个月的话可以直接把LB里生长的菌液保存在4度,或接到LB平板,生长过夜后保存在4度,长期保存的话,菌液加甘油保存在-20度,想放很久不用的话最好加甘油保存在-80或者液氮中。甘油浓度20%就可以了。
基因工程实验Ⅱ
大肠杆菌质粒
DNA的
抽提
及检测『Protocol』
答:
紫外分光光度法 :DNA的吸收峰在260nm处,蛋白的吸收峰在280nm处
,因此可以用OD260/OD280判断DNA纯度,一般认为比值在1.8~2.0之间时,纯度较高 材料:含有pSK II质粒的大肠杆菌菌株的菌液、含有MP3质粒的大肠杆菌菌株的菌液 试剂:①细菌的培养:LB培养基、氨苄青霉素 ②细菌的裂解与收集:溶液I(...
大肠杆菌质粒的提取
答:
1、接1%含
质粒的大肠杆菌
细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于冰...
大肠杆菌
提
质粒
要摇多久
答:
12小时。
大肠杆菌
提质粒需要将转染过的大肠杆菌放进AMP-LB液体培养基,将摇瓶放置于37℃恒温培养箱中培养12小时,通过离心力将
大肠菌
沉淀到培养基的底部,倒掉上清后,用冰的75%乙醇洗沉淀,除去上清后,用氯化镁溶液沉淀RNA,
提取质粒
。
大肠杆菌质粒提取
过程中,哪一步最关键?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
如何
提取大肠杆菌质粒
DNA?
答:
经过苯酚、氯仿
抽提
。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的
质粒
DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等
要求
,故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时,可采用氯化铯方法抽提,但该方法比较复杂,对技术要求高,花费时间长,也比较昂贵。
质粒
导入
大肠杆菌
要用什么处理该菌,以使其处于什么细胞状态,从而吸收D...
答:
将
大肠杆菌
用氯化钙处理,以增大大肠杆菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组
质粒
能够进入受体细胞,此时的细胞处于感受态(理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态)。
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