99问答网
所有问题
当前搜索:
大肠杆菌的质粒提取用什么菌
如何把
大肠杆菌
中
的质粒
转入脓杆菌?
答:
如果是穿梭质粒的话,
提取出来直接转化感受态的农杆菌就好
。步骤:农杆菌感受态细胞的制备 1.挑取少许农杆菌,接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中,28℃、200r/mim培养过夜。2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养,直至OD800 为0.5左右。3.将培养物置冰浴中30min,4...
质粒提取
时挑
菌
必须是单菌落吗
答:
是。质粒先是被转化到大肠杆菌中,然后挑选单菌落接种到含有特定抗生素的培养基中,
所以质粒提取时挑菌必须是单菌落
。质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。
质粒
转化
用哪种大肠杆菌
答:
要看你是做克隆还是做表达,克隆的话DH5a最常用,原核表达DE3(也叫BL21)最常用。
大肠杆菌质粒的提取
答:
1、接1%含
质粒的大肠杆菌
细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于冰...
基因工程实验Ⅱ
大肠杆菌质粒
DNA
的抽提
及检测『Protocol』
答:
②
细菌
中的RNA可以通过RNaseA去除 ③蛋白质的去除 :细菌中的蛋白质可以通过酚/氯仿/异戊醇
抽提
,酚可以使蛋白质变性,氯仿将微溶 于水的酚抽提到有机相中,使其与水相中的DNA分离。分离后
的质粒
DNA可以通过乙醇回收,乙醇可以消除核酸水化层,暴露其带负电的磷酸基团,因 此在阳离子充足的环境中可以...
质粒提取
的主要步骤是
什么
及其作用
答:
从
细菌
中分离
质粒
DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和TritonX-100(一般很少使用)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会...
...质粒后
提取质粒
的时候会不会把
大肠杆菌
自身
的质粒
也提取出来_百度知 ...
答:
你好!dh5α感受态细胞是常用的
细菌质粒
扩增
提取细菌
,其本身是含有质粒的。普通的
大肠杆菌
细胞内有一种“免疫”机制,即当外源DNA 侵入时,会产生酶类将外源DNA切除,无法进行复制增殖。而其自身质粒的基因组被修饰(如甲基化)所以不被限制酶识别,不会被剪切。DH5α菌株是一种经诱变的菌株,其基本...
大肠杆菌
表达菌株JM109,Top10,Rosetta各自
有什么
特点啊,如何选择?_百度...
答:
3:BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有
质粒
pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该
菌
适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr 4:JM109菌株 该菌株在使用pUC系列...
摇
菌
时50微升的LB培养基里加多少菌液?
答:
可以先加入300ul、100ul、30ul菌液到培养基里面,有时间的话,可以实时监控摇菌瓶中的OD值。一开始可能会比较麻烦,建立好摇
菌的
过程以后,就方便了。一般LB培养
细菌
要抽质粒的话,30ml氨苄抗性LB培养基中加入300ul较为浑浊的
大肠杆菌
,过夜摇菌,约12h,即可
提取质粒
。摇菌时间也与菌种、氧气量有关...
1.将之前已经构建好载体的DH5α活化
提取质粒
2.转化至BL21后筛选 ,请问...
答:
活化就是将冻存的
菌
液,在对应抗性(视具体
质粒
而定)的平板上划线,待菌落长起来后挑取单菌落,摇起来后再提质粒。转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟,然后将5 ul质粒加入感受态细胞,放在冰上20分钟。再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟,然后迅速放回冰中静置3-5分钟。之后将感受态...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
大肠杆菌质粒DNA的提取
大肠杆菌质粒dna的提取实验
从大肠杆菌中提取质粒
大肠杆菌质粒提取原理
大肠杆菌提质粒摇菌时间
大肠杆菌质粒dna提取实验报告
含质粒大肠杆菌保菌的方法
质粒转化大肠杆菌的基本步骤
大肠杆菌质粒dna大小