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大肠杆菌质粒DNA的提取
如何
提取大肠杆菌质粒DNA
?
答:
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大
。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
质粒dna提取
及电泳检测实验报告?
答:
1、
大肠杆菌
细胞溶解将含有大肠杆菌细胞的培养物取1-5ml放入1.5ml离心管中,以10000rpm离心10分钟,弃上清后加入500μl胰酶(20mg/mL)+裂解液(0.2%SDS,50mM Tris-HCl pH8.0,2mM EDTA),37℃水浴振荡2小时。2、
质粒DNA提取
将上述细胞液加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液(25:24:1),...
基因工程实验Ⅱ
大肠杆菌质粒DNA的
抽提及检测『Protocol』
答:
③蛋白质的去除 :细菌中的蛋白质可以通过酚/氯仿/异戊醇抽提
,酚可以使蛋白质变性,氯仿将微溶 于水的酚抽提到有机相中,使其与水相中的DNA分离。分离后的质粒DNA可以通过乙醇回收,乙醇可以消除核酸水化层,暴露其带负电的磷酸基团,因 此在阳离子充足的环境中可以发生”核酸–乙醇沉淀 ④蛋白质、...
大肠杆菌质粒提取
过程中,哪一步最关键?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放
DNA
,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
大肠杆菌
基因组DNA提取和
质粒DNA提取的
异同点
答:
大肠杆菌
基因组DNA提取和
质粒DNA提取
的异同点 提取的步骤基本上都属
DNA的提取
步骤,包括细胞裂解,DNA释放,纯化,最后沉淀溶解.
质粒提取
过程中,有一个DNA变性、复性的过程,这个与基因组提取完全不同,这是利用质粒是以超螺旋结构存在于大肠杆菌中的特殊状态,分离纯化质粒时总是会利用这个特点来分离基因组DNA与...
提
质粒
步骤
答:
提质粒步骤如下:一、步骤 1、接1%含
质粒的大肠杆菌
细胞于2mlLB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管(离心管),以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),...
如何鉴定
提取质粒DNA的
质量和含量
答:
方法用
大肠杆菌
DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组
质粒
,紫外分光光度计定量后,根据重组质粒分子量计算其拷贝数,稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品,取1.0×106、1.0×104和1.0×102拷贝/μl高中低3个浓度的标准品,反复冻融1、6、11、15次和21次后,以冻融后的质粒标准品为模板...
提取大肠杆菌DNA
为什么不直接提取细胞核中进行
提取的DNA
而要从细胞质的...
答:
没有细胞核有拟核;细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。基因工程上
大肠杆菌质粒DNA
是环状的,这样有利于外源目的基因的结合 ,因为环状质粒DNA被限制性内切酶剪切后的黏性末端可以和外源目的基因的结合牢固,并形成和原来结构相似的环状质粒DNA,保持了原来质粒的各种性能 ...
提取的大肠杆菌质粒
里面含有基因组
DNA
(按照碱法大提质粒)该怎么办?如 ...
答:
可以考虑切胶回收,如果你的
质粒
在10k以下,污染的基因组
DNA
量不多,而且基因组DNA弥散不严重的话,在1%的agarose胶里质粒和基因组DNA还是分得比较开的。注意的地方是在加完溶液2裂解细胞的时候要放置在冰上而且时间不能太长,加溶液2以及下一步加溶液3中和时,混合要充分但要轻柔,一般小心颠倒5-10...
植物基因工程实验技术-
提取质粒
答:
rpm(离心机的转速单位,转rpm,以下简写为r)
提取大肠杆菌
中的质粒 查看预约离心机,相应抗生素LB液体要有,管子要有灭好的 摇菌不能超16h 低拷贝数质粒的纯化 从过夜培养的菌液中纯化得到的低拷贝质粒的得率大约为 0.1-1 μg/mL,若要提取中低拷贝数的
质粒 DNA
,请遵循以下准则: ...
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