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质粒提取中大肠杆菌的要求
大肠杆菌质粒
DNA怎样
提取
,用什么方法?
答:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,
提取的质粒
DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:1、接1%含
质粒的大肠杆菌
细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L...
质粒提取的
注意事项
答:
首先,
质粒的提取
可分为质粒小提、
质粒中
提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。质粒小提主要用于用于
大肠杆菌
中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中...
质粒提取的
原理和步骤
答:
因此,如果溶液I中缺了葡萄糖其实对
质粒的抽提
本身而言,几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。那么EDTA呢?大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,配在分子生物学试剂
中的
主要作用是:抑制DNase的活性,和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达10 mM的EDTA,无非就是要把
大肠杆菌
细胞中的所有二价...
质粒提取
过程中需要哪些酶?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
质粒抽提的
注意事项
答:
利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制
质粒的
复制这一特点,在低拷贝质粒的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。
用什么方法可以得到
大肠杆菌的质粒
?
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
提取质粒的
主要步骤
答:
质粒
小提试剂盒 用于
大肠杆菌
中质粒DNA的小量
提取
,它结合了优化的碱裂解法,以及方便快捷的硅膜离心技术,具有高效,快捷的特点,能在30min内完成全部操作。利用试剂盒能从1-5mL过夜培养的大肠杆菌菌液中纯化得到10-40μg高质量的质粒DNA(OD260/OD280=1.7-1.9),此质粒DNA可直接用于DNA序列分析,...
质粒
DNA的
提取
方法总共有哪些,回答的全给高分???
答:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,
提取的质粒
DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:1、接1%含
质粒的大肠杆菌
细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L...
碱裂解法
提取质粒
时,先加的缓冲液使菌体悬浮的原因是什么
答:
[碱裂解法
提取质粒
原理]碱裂解法从
大肠杆菌
(Escherichia coli)制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术可是我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法
质粒抽提的
原理知之甚少追其原因,我想大概是因为分子克隆里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论...
摇菌时50微升的LB培养基里加多少菌液?
答:
可以先加入300ul、100ul、30ul菌液到培养基里面,有时间的话,可以实时监控摇菌瓶中的OD值。一开始可能会比较麻烦,建立好摇
菌的
过程以后,就方便了。一般LB培养细菌要抽质粒的话,30ml氨苄抗性LB培养基中加入300ul较为浑浊的
大肠杆菌
,过夜摇菌,约12h,即可
提取质粒
。摇菌时间也与菌种、氧气量有关...
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