你是不是说混淆了,到底是等电点在pH6-6.5?还是等电点未知,确在6-6.5稳定?
我就先按等电点来理解,回答你的问题。
如果对蛋白纯化的浓度要求不高,或者待纯化样品成分简单,杂蛋白少,就选一种离子交换层析,即阳离子离子交换层析(running buffer 设pH5.0比较合适)或阴离子交换层析(running buffer 设pH7.5比较合适)。
如果杂蛋白多,就用两步离子交换层析,即结合阴阳离子交换层析。一般建议先做阳离子交换层析(这样第一步可去掉核酸之类的)。不知你要多具体的步骤,先写个大致步骤吧:
1,阳离子交换层析:将你的样品置换到pH5.0的running buffer(一般醋酸钠buffer)。同时装住,平衡啥的,然后上样,平衡,洗脱(升pH或盐洗脱),收峰。这步就去掉等电点在6之下的大部分杂蛋白;
2,阴离子交换层析:将所收蛋白置换buffer至pH7.5的running buffer(PB),同时装住,平衡啥的,然后上样,平衡,洗脱(降pH或盐洗脱),收峰。去掉pH6.5之上的大部分杂蛋白。
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如果你确实所指在6-6.5稳定,那就看你蛋白的等电点在多少了,只好选一种离子交换层析,在6.5之上就试试pH6.0的running buffer做阳离子交换层析,在6.0之下,就试试pH6.5的running buffer做阴离子交换层析。
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