设计一个利用阴离子交换柱纯化一个等电点为7.5的蛋白质的实验

Question

急求！！！！希望能尽快得到答案，感激不尽！！！！
是一个生化问答题，能回答得尽量详细点吗？谢谢！！！！

Answer 1

既然是阴离子交换，就要让目标蛋白带负电，那么缓冲液PH就要大于等电点。缓冲体系的选择也很重要，一般用TRIS-HCl，特别是弱阴离子柱不可选用带负电强的磷酸盐缓冲液，否则上样液中被交换的将是磷酸根而不是目标蛋白。一般用NaCl平衡后上样进行离子交换，然后再用较强的阴离子洗脱。追问

您能说得在具体一些吗？太谢谢您了！！！

追答

例如先用NaCl平衡阴离子树脂，用PH8左右的TRIS-HCl缓冲液溶解样品，然后上样吸附，再用NaCl洗脱，用部分收集器将流出液分管收集，检测每管收集液中目标蛋白浓度及杂质情况。
具体操作步骤请参考树脂说明书及有关实验指南、发表的文献等。