有四种蛋白质溶液，其大小和等电点分别是54kD和4，48kD和7，100kD和4，75kD和10 ，请设计实验

Question

1）设计100kD蛋白质纯化实验 . 2）6mol/L盐酸胍处理凝胶柱层析，只测到25kD层析峰；6mol/L盐酸胍以及10mol/L ß-巯基乙醇，测出10kD和15kD，推测其结构
急求

Answer 1

（1）100kD蛋白的纯化可以分为两步：离子交换和分子筛。因为48kD和75kD的蛋白等电点与目的蛋白相差很大，所以在相同的buffer条件下，前两者带点性质与目的蛋白相差很大，通过离子交换的方法可以将三者分开。具体来说可以选用pH5.5左右的buffer，用Q柱纯化。54kD的蛋白和100kD的蛋白电荷性质类似，通过离子交换层析可能分不开，但二者分子量有近两倍的差距，适用于分子筛，所以第二步选用合适的分子筛利用二者分子量的大小分开即可。

（2）6M盐酸胍处理之后除了肽键和二硫键无法打开之外，蛋白完全变性。这种条件下测得的分子量是25kD，加入beta-ME之后二硫键被还原打开，测得分子量为10kD和15kD，说明这二者是通过二硫键相连的，所以结构为一个10kD和一个15kD的亚基通过分子间二硫键的作用连成二聚体。也有可能是异源四聚体，异源六聚体，异源八聚体等等。因为第一步测定的分子量是在盐酸胍条件下，多聚体之间如果没有二硫键连接也会被解聚。如下图：