基因克隆的方法主要有哪几种?简述各种方法的原理和用途。

如题所述

第1个回答  2024-05-26
【答案】:(1)RACE技术:此方法通过设计基因片段内部的特定引物,利用PCR技术扩增已知序列两侧的未知区域,分为5'RACE和3'RACE。5'RACE用于获取基因的5'端,3'RACE用于获取3'端,旨在获得全长基因。
(2)cDNA差示分析法:此法通过PCR技术特异性扩增目的基因片段,通过减少cDNA的复杂性并改变接头序列来实现。通过特定的酶处理和参数设置,确保高纯度的产物和探针。此法用于补充其他克隆技术。
(3)Gateway大规模克隆技术:基于位点特异性DNA片段重组,通过整合与切出反应,实现基因的快速克隆和平行转移。该技术保障了大规模克隆基因组和注释的可译框架。
(4)图位克隆:首先定位目的基因到染色体的特定位置,然后通过染色体步移技术克隆位于两个紧密连锁标记之间的基因片段。后续通过基因功能互作原理来鉴定目的基因,用于分离未知性状相关基因。
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