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基因克隆与分离的主要步骤和方法
如何进行目的
基因
片段
分离
,
克隆和
分析
答:
其基本步骤包括:基因芯片的制备、靶样品制备、杂交与检测、目的基因得分离并获得全长
。2 基因文库技术分离目的基因 基因文库指某一生物类型全部基因的集合。这种集合是以重组体的形式出现。某生物DNA片段群体与载体分子重组,重组后转化宿主细胞,转化细胞在选择培养基上生长出的单个菌落(或噬菌斑,或成活...
基因克隆
答:
使用该
方法
进行
基因克隆
时不需要考虑酶切位点问题,但需要选择Taq DNA聚合酶进行PCR扩增,其产物的3’端才会多一个突出的A;此外,T/A克隆选用商业化的T载体,其为线性化的载体,在3’端有一个突出的T;并且基因片段连入T载体是没有方向性的,正反都有可能。 我们首先从NCBI上获取PVT1(human)的基因序列信息( https...
基因克隆的方法主要
有哪几种?简述各种方法的原理
和
用途。
答:
基本原理:首先,
通过构建遗传连锁图,将目的基因定位到某染色体的特定位点,并在其两侧确定紧密连锁的RFLP或RAPD分子标记
。其次通过对许多不同的生态型及大量限制性内切酶和杂交探针的分析,找出与目的基因距离最近的RFLP标记,通过染色体步移技术将位于这两个标记之间的基因片段克隆并分离出来。然后,根据基因...
基因克隆的基本步骤
有哪些
答:
(1)插入失活法
:外源DNA片段插入到位于筛选标记基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位点后,会造成标记基因失活,表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变,通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法(白色菌落是重组质粒)。(...
基因克隆主要
分为以下几个
步骤
:①制备目的基因
和
相关载体;②___;③...
答:
【答案】:将目的
基因和
有关载体进行连接$将重组的DNA导入受体细胞$DNA重组体的筛选和鉴定$DNA重组体的扩增、表达和其他研究
怎样
克隆
一个目的
基因
?
答:
其
主要步骤
包括:(1)将目标基因定位在高密度的分子标记连锁群上;(2)利用PFGE将连销标记的遗传图谱距转换成物理距离;(3)构建YAC文库,找到含连锁标记的YAC克隆,并通过
克隆的
排序获得目标
基因的
DNA片段;(4)通过转化和功能互补试验证实基因所在的DNA片段。如用该技术已
分离
出番茄抗根结线虫mi
基因和
拟南芥菜抗细菌性茎...
基因克隆的方法主要
有哪几种?简述各种方法的原理
和
用途。
答:
通过整合与切出反应,实现
基因的
快速
克隆和
平行转移。该技术保障了大规模
克隆基因
组和注释的可译框架。(4)图位克隆:首先定位目的基因到染色体的特定位置,然后通过染色体步移技术克隆位于两个紧密连锁标记之间的基因片段。后续通过基因功能互作原理来鉴定目的基因,用于
分离
未知性状相关基因。
基因克隆
有哪些
步骤
,如何筛选阳性克隆
答:
简单的说一下:扩增目的
基因
,比如通过PCR
的方法
。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌 筛选阳性
克隆一般
常采用蓝白
克隆方法
,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。
转座子标签
基因的分离和克隆
答:
Southern-based
基因分离与克隆
技术,通常用于转座子标记
基因的
操作。通过杂交获得纯合突变株,构建基因文库,利用转座子探针筛选目标基因。然而,Mu元件等高效转座子可能导致大量拷贝,使得Southern分析变得复杂,需通过多次杂交减少插入序列数量。为解决这一问题,反向PCR方法应运而生,如Souer等人
的方法
,结合...
从生物体
克隆
目的
基因的方法
有哪些?
答:
实行功能
克隆的
关键
步骤
是
分离
出高纯度蛋白质。对于产物不明的基因,不能利用这一
方法
进行克隆。3.定位(图位)克隆法 定位(图位)克隆法(positionalcloning)根据目的基因在染色体上的位置,进而通过染色体步移(chromosomewalking)进行克隆。需预先建立具有目的
基因的
适宜遗传分离群体(近等基因系或分离...
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