细菌的纯种分离和接种技术中,需要注意的事项有:
1)稀释度的问题
纯种分离的时候,无非是把菌液稀释一定梯度后,涂布在诸如LB培养基上。如果没有稀释好,就会导致细菌长得太密,或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时,能清楚地看清菌落的形态,便于挑取单菌落;
2)杂菌污染的问题
因为用于接种的一般都是营养丰富的有机培养基,这种培养基适合任何细菌生长。在操作过程中,空气和桌面上都会有大量看不见的细菌潜在。在分离和接种前,所有用到的器具和培养基必须在121摄氏度下灭菌20分钟至30分钟。在倒平板时,最好在培养基还是热的时候倒,以减少杂菌感染。所有的操作最好在超净工作台上完成。若没有超净工作台,那就拿两个酒精灯点燃,并用酒精擦拭桌面,在两个酒精灯之间操作。
综上,想要较好地分离和接种细菌,操作人员必须完全保证杂菌的感染,操作熟练,在温度和洁净度上做到最严格。
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