转化效率太低,连接效率太低。
1、转化效率太低:在转化时,可以设立阳性对照,判断转化实验是否正常。要是阳性对照也长不出菌落,证明转化实验没有成功。
2、连接效率太低:连接反应的两种成分DNA应该在一个适当的比例,要是质粒太多,则会出现很多空质粒,最终转化后依然会长出菌落,但菌落却不含目的DNA,可以通过蓝白斑筛选排除含有空质粒的菌落;连接时质粒太少,连接产物将会产生很多线性、不同长度、不含质粒的产物,产物无法在大肠杆菌内正常表达和复制,自然也就无法为大肠杆菌提供抗生素抗性。
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