大肠杆菌转化失败的原因

Question

如题所述

Answer 1

转化效率太低，连接效率太低。
1、转化效率太低：在转化时，可以设立阳性对照，判断转化实验是否正常。要是阳性对照也长不出菌落，证明转化实验没有成功。
2、连接效率太低：连接反应的两种成分DNA应该在一个适当的比例，要是质粒太多，则会出现很多空质粒，最终转化后依然会长出菌落，但菌落却不含目的DNA，可以通过蓝白斑筛选排除含有空质粒的菌落；连接时质粒太少，连接产物将会产生很多线性、不同长度、不含质粒的产物，产物无法在大肠杆菌内正常表达和复制，自然也就无法为大肠杆菌提供抗生素抗性。