转化前载体与DNA于16℃连接12h，感受态冰上化冻后立即加入连接产物，冰上放置20-30min，热激60s，后立即转到冰上静置2min，加1ml LB液体培养基于37℃恒温水浴摇床培养复菌1h（不含amp），离心弃850-900菌液，后涂版
1 LB固体培养基不加amp，10h后没有菌落
2 LB固体培养基加amp，连接产物的不生长（600bp），加载体中对照标准片段（700bp）不生长，（注，以上两种都进行16℃连接转化）直接加载体于感受态的的不生长（直接加入后转化）
说明热激过程有问题，但42℃我经过温度计测量没有问题，感受态也换了几批，实在是想不出问题来了
哎，此实验耽搁我大半学期时间，至今未果，我这个心情呀
这句说错了“1 LB固体培养基不加amp，10h后没有菌落”
实际是： 1 LB固体培养基不加amp，10h后形成致密菌落
应该是转化的问题吧
因为不加amp能生长，加了的，无论是什么实验，都不生长。
我一直考虑载体问题，可换了三次载体了，全是买的，最近定的pmd-18T
载体，我没法怀疑是它的问题了
amp也没有失效呀，因为不加AMP的都长了
我是说你载体的AMP表达有问题 所以不加AMP的都长了 先按照我说的实验步骤试试咯
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