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如何做好聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳,那些是关键步骤
如题所述
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推荐答案 2011-12-31
我做实验的时候,最主要是把凝胶制备好。需要注意的有:1、密封条要封好,不能漏水;2、灌胶时用
移液管
,可以慢一点,并水平移动,防止凝胶不均匀,凝胶不会很快凝固,所以不用担心;3、灌胶时不能有气泡产生,否则会影响后面凝胶的效果。
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第1个回答 2011-12-31
底胶要封好(如果需要封底胶的话),加聚丙烯酰胺的时候要多加一些以免凝胶的过程中出现缩胶现象,拔梳齿的时候要两端用力均匀,不可左右来回晃动拔梳子,灌好之后要等几分钟看看玻璃板和耳朵板之间是否有气泡产生。其他的应该没什么了吧
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如何做好聚丙烯酰胺垂直板电泳
?哪些
是关键步骤
?
答:
一,
清洁好制胶的玻璃板,一定要尽量用去离子水冲干净,以除去肉眼可见或不可见的杂质
二,根据你目的蛋白的分力量,选择合适的分离胶和浓缩胶 三,如果要获得最佳的胶图,可以一直使用恒流直至电泳结束,但要根据实际情况,不能把电流设置过小,防止电泳时间过长,蛋白在胶上会弥散,也不能设置太大,...
聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验操作过程中,应注意哪些事项?
答:
一、凝胶制备时:TEMED和AP要后加,加入后用玻棒缓慢匀速的混匀,避免有气泡产生
;然后马上注入电泳槽内,插入梳子,这时也要匀速,但不能太慢,因为太慢的话底部的胶会比上面的胶凝的快,影响胶的质量,同时小心有气泡;二、加样时要注意:1.每空的上样量不能过大,以免样品溢出,造成各泳道相互...
15%变性
聚丙烯酰胺凝胶电泳
的
步骤
答:
1、
清洗干净两块玻璃板,晾干后按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边
,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角。把玻璃板在灌胶支架上固定好。3、 分离胶:按1∶3∶8∶水=1∶2∶4∶1的比例,先将贮备液1,3和水放在一小烧...
聚丙烯酰
氨
凝胶电泳
过程
答:
此外,该技术在纯化过程中的质量检测也十分重要,纯化后的蛋白质在电泳中应表现为单一的条带,若出现多条带,则可能表示蛋白质由不同亚基组成。SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳
以其高灵敏度(只需微克级蛋白质)、同时提供分子量信息,对未知蛋白的研究和提纯过程设计具有关键价值。
聚丙烯酰
氨
凝胶电泳
的过程
答:
因而SDS
聚丙烯酰胺凝胶电泳
可以用于测定蛋白质的分子量。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同...
聚丙烯酰胺凝胶电泳
答:
在PAGE中,通常使用聚合物凝胶作为分离媒介,并使用二极管电场(即在两个极板间加上电荷反向的电场)来推动样品分子的迁移。PAGE分离出的生物大分子经过染色或Western blotting,可以得到相应蛋白质或核酸的分子质量及其含量信息。第二段:
聚丙烯酰胺凝胶电泳
在生物科学中的应用 PAGE广泛应用于生物科学中,尤其...
技术| 一文读懂
聚丙烯酰胺凝胶电泳
(PAGE)
答:
在分子生物学的前沿
,聚丙烯酰胺凝胶电泳
(PAGE)技术像一座桥梁,连接着蛋白质的神秘世界。它凭借卓越的分辨率和多功能性,成为了科研实验室里的得力工具。通过电荷、大小和形状的差异,PAGE为我们揭示了DNA、RNA和蛋白质的复杂动态。SDS-PAGE,其名字中“SDS”即十二烷基硫酸钠,是变性蛋白的魔术师,通过...
SDS
聚丙烯酰胺凝胶电泳
的实验
步骤
答:
1.样品的浓缩效应以往不连续
电泳
系统中,含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly,pH8.3)、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl,pH6.8)、分离胶缓冲液(Tri s—HCl, pH8.8),两种
凝胶
的浓度(即孔径)也不相同。在这种条件下,缓冲系统中的HCl几乎全部解离成Cl一,两槽中的Gly(pI一6.0,pK a=9.7) 只有很少...
做好聚丙烯酰胺凝胶电泳
分离血清蛋白的
关键步骤
是什么?为什么?_百度...
答:
关键是配胶,分离胶和浓缩胶的配制很重要,如果没有封好底分离胶不凝,你实验就没法做了,别外你血清蛋白的稀释也很重要,不然杂蛋白太多了也无法看到,如果能做个盐析什么的就更好了,这样的蛋白干净,能去除很多非血清蛋白。
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