植物DNA提取,分析结果时老师说有降解严重!

材料是取的新鲜材料,-20冷冻过夜的
100V电泳跑了两个小时,胶是1.2%的,会不会与这有关?

不知道你提的这个DNA样品用RNase处理过没有?
如果没有处理过的话,可能你的样品里有大量的RNA存在,显得电泳拖尾,不一定是你的DNA降解严重。另外,电泳图中没有看到明显的DNA条带存在,可能的原因是:1.DNA真的降解了;2.最后提取出来的DNA溶液里DNA浓度太低。
如果你用RNase处理过了,那么能够说明你的DNA降解的厉害。那最好使用新鲜的组织,-80度保存的组织也好,不要-20度保存的。追问

没用RNase处理~~~不知道RNase的配方~~~
还有,-20保存的和-80的有什么不同?

追答

提基因组鉴定,0.7%-1%的浓度的胶就够了,不知道你的电泳槽是多长的?电压大约5V/cm,20-30分钟就足够了。
试剂公司有卖RNase的,浓度可能是10mg/ml的,在研磨消化过程或者是抽提一次之后加入适量的RNase,消化个把小时就可以了。或者你在提取出来DNA之后加入RNase消化,然后重新沉淀DNA。得根据沉淀的量来加适量的溶液溶解。
假定材料很新鲜,一般的提取DNA的过程,我觉得各项操作对DNA的降解影响不是很大,尽量温和点操作。
-80度保存的组织比-20度保存的组织新鲜的多,蛋白、DNA、RNA被破坏的程度很低。

追问

RNase酶准备的有,也就是不知道加多少好,这个再看看……
比较关键的是现在没有-80的条件,听说4度的保鲜不错,但不知道研磨的话情况会怎么样~~~~想问下怎样研磨比较好,尽可能的降低降解率

追答

对于植物来说,4度保鲜估计会挺好的。要想研磨的好的话,加液氮研磨比较好。
操作尽量温和一点,通常研磨和震荡溶液的力量会使DNA断裂。

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第1个回答  2011-03-21
一般DNA还算比较皮实的,如果你的样品提纯,并且经过RNase处理,跑成这个样子可能是降解了,但是如果蛋白抽提的不干净,还有大量RNA,就会有严重拖尾,可也把你的样品用酚氯仿再抽提一次,经过酒精沉淀,再跑跑看看。
另外看你提的是什么材料,有的材料不好提,需要裂解充分,抽提充分
第2个回答  2011-03-21
从图片来看,四个样品槽的条带都严重拖尾,里面的DNA条带不集中,表明DNA是已经被降解成各种小片段。
DNA十分脆弱,可能照成DNA降解的因素有很多。
罗列几种我能想到的:从植物中提取DNA时没对细胞内的DNA酶进行灭活;过程中被细菌污染;口水等含酶的物质飞入样品;过程中温度、pH剧烈变化。
这个问题要进过多次的讨论,重复的实验才能找到真正的原因。追问

那细胞内的DNA酶怎么灭活,其他的原因,细菌污染不可避免呀~~~~我的是CTAB法提取的,研磨过程中DNA会降解吗?

第3个回答  2019-01-06
试试用RNase处理,因为RNA污染会带走电泳液染料,DNA亮度就很低,可以试试把样放4℃冰箱2-3天,在DNA不降解的情况下让RNA降解,然后再跑胶,可能就会看到DNA条带
第4个回答  2011-03-21
这确实是讲解非常严重的
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