没用RNase处理~~~不知道RNase的配方~~~
还有,-20保存的和-80的有什么不同?
提基因组鉴定,0.7%-1%的浓度的胶就够了,不知道你的电泳槽是多长的?电压大约5V/cm,20-30分钟就足够了。
试剂公司有卖RNase的,浓度可能是10mg/ml的,在研磨消化过程或者是抽提一次之后加入适量的RNase,消化个把小时就可以了。或者你在提取出来DNA之后加入RNase消化,然后重新沉淀DNA。得根据沉淀的量来加适量的溶液溶解。
假定材料很新鲜,一般的提取DNA的过程,我觉得各项操作对DNA的降解影响不是很大,尽量温和点操作。
-80度保存的组织比-20度保存的组织新鲜的多,蛋白、DNA、RNA被破坏的程度很低。
RNase酶准备的有,也就是不知道加多少好,这个再看看……
比较关键的是现在没有-80的条件,听说4度的保鲜不错,但不知道研磨的话情况会怎么样~~~~想问下怎样研磨比较好,尽可能的降低降解率
对于植物来说,4度保鲜估计会挺好的。要想研磨的好的话,加液氮研磨比较好。
操作尽量温和一点,通常研磨和震荡溶液的力量会使DNA断裂。
那细胞内的DNA酶怎么灭活,其他的原因,细菌污染不可避免呀~~~~我的是CTAB法提取的,研磨过程中DNA会降解吗?