制备感受态为什么要用0.3m的蔗糖

Question

如题所述

Answer 1

制备感受态要用0.3m的蔗糖原因是， 铬酸银。。。是红棕色单斜结晶或粉末,溶于酸、氨水、氰化钾溶液、铬酸碱金属溶液,微溶于水,作化学试剂。用作分析试剂,有机合成催化剂,电镀,卤化物莫氏法滴定确定终点的指示剂。。。。由铬酸钾溶液加硝酸银溶液反应,经过滤生成沉淀而得。

Answer 2

感受态细胞制备原理原理：目前，感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面，通过热激作用促进细胞对DNA的吸收。转化效率可达106-107转化子/微克DNA。本方法的关键是选用的细菌必须处于对数生长期，实验操作必须在低温下进行。操作：1、取-70℃冰冻菌种，用划线法接种细菌于培养皿，做好标记，于37℃培养过夜。2、第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有3ml LB培养液的试管中，37℃振荡培养过夜。次日取菌液1ml接种至含有100ml LB培养基的500ml烧瓶中，37℃剧烈震荡培养约2~3小时（200~300r/min）3、当菌落600nm OD值达到时，将烧瓶取出放置冰上10~15分钟。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中。4℃，4000g离心10分钟。4、弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加10ml 0.1M的CaCl2到离心管中，振荡混匀，悬浮菌体，冰浴30分钟。5、4℃，4000g离心10分钟，弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加4ml冰预冷的0.1M的CaCl2,重悬浮菌体。每管分装，至4℃保存备用，24-48小时内使用效果较好。如果暂时不用，可再保存于-70℃的低温冰箱中。
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感受态细胞制备原理
感受态细胞制备原理
原理：
目前，感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温（0℃）时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。此时细菌膨胀成球形，外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面，通过热激作用促进细胞对DNA的吸收。转化效率可达106-107转化子/微克DNA。
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本方法的关键是选用的细菌必须处于对数生长期，实验操作必须在低温下进行。
操作：
1、取-70℃冰冻菌种，用划线法接种细菌于培养皿，做好标记，于37℃培养过夜。
2、第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有3ml LB培养液的试管中，37℃振荡培养过夜。次日取菌液1ml接种至含有100ml LB培养基的500ml烧瓶中，37℃剧烈震荡培养约2~3小时（200~300r/min）
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3、当菌落600nm OD值达到时，将烧瓶取出放置冰上10~15分钟。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中。4℃，4000g离心10分钟。
4、弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加10ml 0.1M的CaCl2到离心管中，振荡混匀，悬浮菌体，冰浴30分钟。
5、4℃，4000g离心10分钟，弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加4ml冰预冷的0.1M的CaCl2,重悬浮菌体。每管分装，至4℃保存备用，24-48小时内使用效果较好。如果暂时不用，可再保存于-70℃的低温冰箱中。

Answer 3

看了很多文献，其中对一些细菌的电转感受态的制备，是利用一定浓度的蔗糖溶液（有0.3M的也有0.5M的）来洗涤的，主要是为了：
洗涤是为了去除培养基以及各种离子，否则在电转的时候会击穿电转杯，电转就是无效的。
加蔗糖是为了保持渗透压，维持渗透压防止裂解，还有就是调节溶液密度便于离心收集。