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如何制备感受态细胞
感受态细胞
的
制备
方法是什么?
答:
感受态细胞制备常用方法是CaCl2法
。感受态细胞:是指用理化方法诱导细胞,吸收周围环境中的DNA分子,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。CaCl2法制作感受态细胞的步骤:1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落,接种至10 mLLB普通肉汤中,37空气摇床震...
感受态细胞
的
制备
答:
感受态细胞的制备如下:
1、从37℃培养过夜的新鲜平板中挑DH5α单菌落,接种到5mLLB培养基中,37℃下270r/min震荡培养过夜
;2、取2mL过夜培养菌液注入到100mLLB培养基中,37℃下激烈震荡培养至A600=0.4~0.6(约2h);3、将培养液转移到灭菌过的50mL离心管中,在冰上放置10min;4℃下4000r/min...
感受态细胞
的
制备
答:
感受态细胞的制备如下:
1、实验仪器及试剂
仪器超净工作台,摇床,高压灭菌锅,培养箱,制冰机,超低温冰箱,离心机,接种环,试管,摇瓶(2L),平板,移液枪,枪头,离心管(500mL),EP管(1.5mL),蓝盖瓶,泡沫箱 试剂CaCl2溶液PIPES1.51g,CaCl2•2H2O4.41g,甘油75ml,pH=7.0,定容至5...
感受态细胞
是
如何制备
的
答:
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。2、 弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成
感受态细胞
悬液...
感受态细胞
的
制备
答:
目前,
感受态细胞
的
制备
常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备,即用低渗CaCl2溶液在低温(0℃)时处理快速生长的细菌,从而获得感受态细菌.此时细菌膨胀成球形,外源DNA分子在此条件下易形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附在细菌表面,通过热激作用促进细胞对DNA的吸收.转化效率可达106-107转化子/微克DNA。注意...
大肠杆菌感受态细胞的
制备 感受态细胞
制备成功关键有哪些
答:
感受态细胞
的
制备
(cacl2 法)1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。2、弃去上清,用预冷的0.05mol/l的cacl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/l的cacl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上...
感受态细胞怎样制备
答:
5-2h。3.将菌种在冰上放置10min。4℃、4000rpm下离心10min收集菌体。4.弃上清,用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞,冰浴30min。5.收集菌体,条件同上。6.弃上清,在冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液。7.分装保存(40%甘油与
感受态细胞
1:1混合,使甘油的终浓度为20%)。
谁做过酶切质粒的实验啊,制
感受态细胞
然后转化呢?求详细过程及注意要点...
答:
大肠杆菌电转化
感受态细胞制备
第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有50...
大肠杆菌
感受态细胞
的
制备
及质粒的转化结果
怎么
分析?
答:
材料及方法 菌种:大肠杆菌BL21菌株 质粒:pGEX-6P-1感受态制备方法:
CaCl2法
转化方法:热激法 CaCl2制备感受态的原理。细菌处于0·C,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42·C短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物。感受...
氯化钙
制备感受态细胞
的原理
答:
用氯化钙溶液
制取感受态细胞
的原理是:氯化钙溶液可使得细胞膨胀,细胞膜磷脂双分支层形成液晶结构,使细胞的通透性变大,便于外源基因或载体进入感受态细胞。具体原理如下:将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时钙离子会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构...
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