电转化感受态细胞最后一次洗涤为什么要用10%甘油洗

如题所述

第1个回答 2017-04-10

电转化感受态细胞最后一次洗涤为什么要用10%甘油洗
大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天： 1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天： 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中 5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时 6. 定时监控O.D.600值（培养1小时后每半小时测定一次） 7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时） 8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液本回答被网友采纳

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电转化感受态细胞步骤答：4、用预冷的水轻轻重悬菌液，先加入少量水重悬菌体，然后把水加满，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，弃上清液。5、再用10%甘油重复步骤四两遍，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，最后一次倒尽上清液后，用残存管底的甘油悬浮细胞。6、分装100微升到数个Eppendorf管中，然后放入液氮中进行中速冻，...

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几种感受态细胞制备的效果比较答：为了提高转化效率, 实验中要考虑以下几个重要因素：1. 细胞生长状态和密度: 不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从－70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600 为0.5 时,...

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