电转化感受态细胞原理

Question

如题所述

Answer 1

电转化感受态细胞原理如下：

电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为109～1010 转化子/µg DNA；对于热激法，是利用冰冷的CaCl2处理对数生长期的细胞，可以诱导其产生短暂的“感受态”，易于摄取外源DNA。转化效率为106 ～107转化子/µg DNA。

电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤

1、前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜。

2、取2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600＝0.6（约2.5-3小时）。

3、将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作。

注意的事项

细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5a菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml）；所有操作均应在无菌条件和冰上进行。