可以评价
抗氧化剂的活性的方法:
抗氧化 -评价方法 ORAC
ORAC是OxygenRadicalAbsorptionCapacity(氧化自由基吸收能力)的缩写,是一种测试抗氧化能力的评价方法体系。
既然科学已证明抗氧化对人体的重要性,那么对抗
氧化效果进行量化是一个迫切需要解决的问题。只有抗氧化效果可以被量化,才能使企业研发出更好的产品、获得政府的认可、向消费者证明其产品抗氧化的有效性。
在ORAC方法未推出之前,因为抗氧化测试的极其复杂性,商业界(极其复杂的实验方案不可能被商业界所应用,当时一个严谨的抗氧化实验往往需要几个月,且费用
巨贵,是商业界无法接受的)无法有效、全面的测试出样品的抗氧化力,然而商业是科技创新的动力,就像
苹果公司。
ORAC抗氧化测试包括对:过氧化自由基(含亲水性、亲脂性)、羟基自由基、过氧亚硝基、
单线态氧、超氧阴离子这五种人体最主要的活性氧自由基进行全面的分析,能有效得出样品的抗氧化实际能力及分布情况。
ORAC抗氧化生物测试是比普通抗氧化测试的更高一层的测试方案。利用人体细胞有效测试出样品的抗氧化力(生物利用度)。
ORAC已被美国AOAC评定为抗氧化测试标准方法,是国际主流测试方法。
其他评价方法
抗氧化不仅仅是一个概念,对生物体抗氧化的效果是可以量化测定的,作为动物实验一般是服用抗氧化剂一定时间后,测定血液中的酯质过氧化产物丙二醛变化、以及肝脏匀浆中
超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的活力变化。从上述两种酶和MDA的变化状况来判定抗氧化的强度及效果。作为人体不可能测肝脏匀浆,可以测定血液或者尿液中的MDA,以及血液中的SOD、GXH-PX来判定抗氧化的效果。
食物中氧化剂长期以来倍受国内外学者关注,这是因为:
①食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质。
②在人体消化道内具有抗氧化作用,防止消化道发生氧化损伤。
③吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用。
④来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。
体外评价方法
虽然很多,但主要基于两类一个是通过测定样品抑制
脂类物质氧化的能力来评定被测物的抗氧化能力另一个是用样品对人工合成的自由基的清除能力来反映待测物的抗氧化活性。抗氧化剂在食品和生物体系中的抗氧化活性受很多因素的影响,其中主要包括抗氧化剂在水相和油相间的分配效应,氧化条件和环境,被氧化底物物理状态等。
1.抗油脂过氧化力测定
脂类包括的范围很广,是构成生物膜的主要成分,脂类中的
不饱和脂肪酸可以过氧化,脂类过氧化过程中会产生L、LO、LOO-等自由基以及LOOH,这些产物会损伤
生物细胞。因此,能够抑制脂类过氧化具有重要的生物学意义。
A硫氰酸铁法FTC:硫氰酸铁盐(FTC)比色法是基于在酸性条件下,脂质氧化形成的过氧化物可将Fe2+氧化成Fe3+,然后Fe3+与硫氰酸根离子可形成在480-515nm内有最大吸收的红色
络合物。通常用500nm处吸光值的高低表示物质抗脂质过氧化的能力,吸光值越小,表明物质的抗脂质过氧化能力越强。
B硫代巴比妥酸反应物TBARs法:是评价油脂的氧化程度的常用方法。油脂或者
亚油酸氧化后的终产物主要是丙二醛,这些过氧化产物与硫代巴比妥酸作用生成有色化合物,该有色化合物在530nm左右有吸收。
2.清除DPPH能力的侧定
DP是一种早期合成的有机自由基,常用来评估抗氧化物的供氢能力,它在有机溶剂中非常稳定,呈紫色,而且在处有一个特征吸收峰,当遇到自由基清除剂时,DPPH的孤对电子被配对而使其退色,也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此,可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。
3.还原能力的测定
还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供体的方法,还原力强的样品应该是良好的电子供应者,它供应的电子不仅能使Fe3+还原为Fe2+,也可以与自由基反应。还原力的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法。
4.抑制LOX酶实验
脂肪氧化酶LOX在植物中分布广泛是一种非血红素铁蛋白,分子量为90一100KD。这种酶蛋白有多个多肤链组成,含有三价铁离子金属辅基则有活性,而包含二价铁离子的金属辅基则缺乏活性。在生物体内的主要作用是,专一催化含有顺,顺一戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应,生成具有共扼双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物。在生物体内的主耍底物是甘油脂类〔如
磷脂)释放的游离不饱和脂肪酸,其中动物体内的主要底物是
花生四烯酸,植物体内的主要底物是亚油酸和
亚麻酸,主要产物为过氧羚基型脂肪酸。
上述方法是抗氧化剂的应用效果的体内、外测定评价方法。