怎么算TCID50

如题所述

关于tcid50计算方法如下:

TCID50,即指能在培养板孔或试管内引起半数细胞病变或死亡(cytopathic effect,CPE)所需的病毒量,用以表征病毒的滴度。

注意:这里的病毒量不是具体的浓度,而是将原始样品稀释的倍数。比如,1mL培养液,稀释1000倍后恰好导致50%的细胞感染,则TCID50为1000/mL。意思是每mL样品中含有的病毒导致50%细胞感染需要稀释的倍数。

一,采用终点稀释法测定病毒滴度(以96孔板为例)

提前一天铺细胞。每孔接种5×103个细胞准备感染。稀释病毒。在10个1.5mL无菌EP管中各加入900μL无血清Grace培养基,在其外依次标明-1、-2……-9,最后一管作为对照。

取100μL待测病毒加入第一管中,旋涡震荡混匀,从中取100μL再加入第二管,震荡后再取100μL加入到第三管,依此类推,直至将第八管中100μL加入到第九管中。

感染。吸出细胞培养基,将10-9梯度的病毒稀释液加入到96孔板的第九排,每孔100µL,6个或8个重复孔。10-8梯度的病毒稀释液加入到第八排,依此类推。空白对照加入100µL无血清Grace培养基。

换液。2小时后将含有病毒稀释液的上清吸出,加入120-150µL有血清细胞培养基。27℃培养5-7天。通过倒置荧光显微镜下观察EGFP或mCherry表达(蛋白所带荧光蛋白),计算病毒滴度。

按以下公式计算出病毒的TCID50:TCID50/ml=10(a+x)×200/ml其中,a=lg(n);n=感染率高于50%的最接近稀释度;b=n稀释度的感染率;c=低于n的最接近稀释度的感染率;x=(b-50%)/(b-c)。

二,绘制生长曲线(以24孔板为例)

铺细胞。毎孔接种新鲜状态良好的细胞。准备病毒稀释液。以特定的感染复数感染细胞,计算并准备病毒稀释液。用培养基稀释病毒。感染。吸出细胞培养基,加入病毒稀释液。27℃吸附1小时后,吸出病毒,无血清Grace 漂洗细胞两次,再换成500 ul含血清的培养基,27℃培养。

分别在感染后0,12,24,36,48,72和96小时,吸取上清,离心过滤,置于4℃备用。终点稀释法测定每个时相的病毒滴度。利用Excel绘制病毒生长曲线,下图为使用该方法所得生长曲线结果。

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