母种培养基如何制作?

如题所述

上述7个培养基配方中,马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA)应用最普遍,在此着重介绍PDA培养基的配制方法。
(1)配制选择优质马铃薯,去皮,挖去发芽根,削去青皮切成薄片,称取200克,置于钢精锅或铝锅,加水1000毫升,煮沸后小火保持30分,用4层纱布过滤,取其汁液(上述配方中麸皮、米糠、玉米粉、黄豆粉、木屑等用同法取其汁液)。若滤液不足1000毫升,加水补足。然后加入琼脂继续加热,待琼脂完全溶化后,再加入葡萄糖,补水至1000毫升,用玻璃棒搅拌均匀,趁热分装试管或三角瓶中备用。(2)分装试管将配制好的PDA培养基,趁热到入事先准备好的分装器或漏斗、量杯,分装试管。每支试管培养基为管长的1/5~1/4,培养基液不可黏附管口内壁,如有黏附物必须擦试干净,以防杂菌感染。(3)塞棉塞棉塞要紧贴管壁,松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜,光圆不起皱,插入管口的长度为棉塞总长的2/3。然后将塞好棉塞的试管绑扎成捆,管口棉塞处用牛皮纸包扎好,以防灭菌时棉塞受潮,引起杂菌感染。(4)灭菌将包扎成捆的试管,放入手提式高压灭菌锅内,在0.15兆帕压力下灭菌30分钟。使用手提式高压锅时必须按要求进行操作,特别要注意加水和熄火这两个技术环节,以防烧锅、水浸试管和试管破裂、冲塞等人为事故。(5)排成斜面将取出的试管冷却到50~60℃后,放到用木架或木条摆成一定角度的斜面上,使之凝成斜面,倾斜度以斜面达到管长的1/2为度。待完全凝固后,即成试管斜面培养基,供分离、培养母种用。(6)检验随机抽取3~5支试管,置于25~30℃下培养3天左右进行培管查杂。若所查试管培养基表面或内部均无任何变化,则表面灭菌效果好,可供接种培养用;若个别试管的斜面上有杂菌菌落,说明灭菌不彻底,要重新灭菌。这种检验不是每次灭菌时都要进行,一般在新购灭菌锅灭菌时或中途长时间未用和随机抽验时才进行这种检验的。
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