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胶回收后为什么还要pcr
如题所述
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推荐答案 2022-11-21
这样可以保证PCR产物量多,而且保真性也好。跑胶,胶回收,胶回收溶解DNA,尽量用比较大的体积的水溶解下来,这样可以保证最大的获得PCR产物,去加A尾,加A尾时,使用ATP和dATP都可以,ATP跟dATP不可浓度太高,太高浓度的dATP会抑制taq酶的活性,taq酶加的时候要控制在总体积的百分之十以内,加A尾一般是72度,30min.l,自己做的时候可以适当延长时间。
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DNA割
胶回收后
电泳检测有一条带,然后将回收的DNA做模板再次
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...
答:
这是模板浓度过高,造成引物相对稀释引起的
。将回收产物梯度稀释,再扩增即可。
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为什么
有时候跑不开呢
答:
建议用原模板进行PCR,如果担心PCR 量较少,可同时扩增几管(最后回收成1 管)
,如果 PCR 产物较纯(无非特异性杂带),则可以直接采用纯化,相对于胶回收,可以减少损失。如果PCR 产物可能存在突变,混在一起后会比较麻烦,你可以就一管回收下来,先连T 克隆,在进行后续载体的构建。PS:做T 克隆...
PCR过后
,做
胶回收
的目的是
什么
?
答:
胶回收的目的是得到比较纯的目的基因的条带,以便可以更好地进行下一步实验
。聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手...
胶回收
试剂盒和
PCR回收
试剂盒的区别
答:
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,
后者的回收效率低
,但是很纯净。胶回收试剂盒操作步骤:配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的...
PCR
之前错加入
了
lodding Buffer
答:
博凌科为-为你解答:如果你浪费掉的DNA的量很大,做一次
胶回收
或是醇沉,
回收后
重新作为模板进行
PCR
;如果你只是浪费了一点DNA,那就用剩下的重新做PCR好了。
植物基因工程实验技术-
胶回收
答:
(2)多数回收试剂盒对于过小或过大的DNA片段的回收效率较低。因此,在回收过小或过大的 DNA时(尤其是目的基因片段过小),需要注意查看说明书中的 DNA片段大小范围。 (3)有些酶切产物酶切后仍为单一的 DNA片段,不需要进行跑
胶回收
,如目的基因
PCR
产物酶切后,往往只切除掉
了
几个保护碱基。这种情况下,直接向酶切...
求大师级人物解答:我的
胶回收
条带是1300bp左右,可是
为什么
用载体连接后...
答:
菌液
PCR
很不稳定,而且很容易出现假阳性。所以建议你酶切鉴定,或者用载体上的标记引物PCR,这两个都比较可靠。其实最合适的是测序,比起酶切,还是测序划算。
PCR
产物电泳做
胶回收
不也得到纯化的目的?PCR产物纯化试剂盒的好处是
什么
...
答:
PCR
产物纯化试剂盒去除的是PCR反应体系中的离子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段。这只适合于几乎没有非特异性条带的PCR产物的收集。如果你的PCR产物具有非特异性条带,那么一定需要使用
胶回收
试剂盒。
胶回收
产物是
pcr
已纯化吗
答:
不是。根据律渐查询显示,
胶回收
产物是
pcr
,是未纯化的,因为又引入
了
酶,引物等,纯化,即由多种物质的聚集体,通过物理、化学或生物方面的方法作用,变成一类或一种物质的过程。
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