如何做好RNA质控

Question

如题所述

Answer 1

样品中RNA的纯度及整体质量对于后续的实验有重要的影响。以下是进行PCR array前RNA质控的推荐标准：
定量：NanoDrop/Spectrophotometer（用于检测样本中的核酸浓度，蛋白与核酸的比例及是否存在污染，例如有机物/盐离子等污染）。请记录样品的浓度，230，260及280的吸光值。此方法无法评估RNA的完整性。
● 浓度：最佳浓度是100-150ng/uL。如果低于此浓度，可以使用PreAMPsystem或者通过浓缩的方法提高RNA浓度。可以通过配套的QIAGEN 过滤柱，减小洗脱体积来实现样品的浓缩。通过拨打QIAGEN客户服务热线400-880-0325，可以获得样品浓缩方面的帮助。
● 260/280比值：这一比值用于反应RNA浓度与蛋白浓度的比值。理想值应当在1.8-2.0，如果比值低于1.8，表明存在蛋白或其他污染。
● 260/230比值：这一比值用于反应RNA浓度与共提取污染的比值。理想值应当在1.8-2.2，如果比值低于1.8，表明存在有机物/盐离子等污染。这些污染会影响后续qPCR反应。

RNA完整性检测：通过凝胶电泳或bioanalyzer来分析RNA的完整度，从而保证RNA的质量，防止RNA的降解对后续实验的影响。以下内容是RNA完整度的通用标准：
● 28S/18S比值：>1.5为高质量，1.3-1.5勉强可用，<1.3为较差质量。
● RNA Integrity Number (RIN): > 7为高质量，6-7勉强可用，< 6为较差质量。

Answer 2

品中RNA的纯度及整体质量对于后续的实验有重要的影响。以下是进行PCR array前RNA质控的推荐标准：

定量：NanoDrop/Spectrophotometer（用于检测样本中的核酸浓度，蛋白与核酸的比例及是否存在污染，例如有机物/盐离子等污染）。请记录样品的浓度，230，260及280的吸光值。此方法无法评估RNA的完整性。
● 浓度：最佳浓度是100-150ng/uL。如果低于此浓度，可以使用PreAMPsystem或者通过浓缩的方法提高RNA浓度。可以通过配套的QIAGEN 过滤柱，减小洗脱体积来实现样品的浓缩。通过拨打QIAGEN客户服务热线400-880-0325，可以获得样品浓缩方面的帮助。
● 260/280比值：这一比值用于反应RNA浓度与蛋白浓度的比值。理想值应当在1.8-2.0，如果比值低于1.8，表明存在蛋白或其他污染。
● 260/230比值：这一比值用于反应RNA浓度与共提取污染的比值。理想值应当在1.8-2.2，如果比值低于1.8，表明存在有机物/盐离子等污染。这些污染会影响后续qPCR反应。

RNA完整性检测：通过凝胶电泳或bioanalyzer来分析RNA的完整度，从而保证RNA的质量，防止RNA的降解对后续实验的影响。以下内容是RNA完整度的通用标准：
● 28S/18S比值：>1.5为高质量，1.3-1.5勉强可用，<1.3为较差质量
● RNA Integrity Number (RIN): > 7为高质量，6-7勉强可用，< 6为较差质量本回答被提问者和网友采纳