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高中生物PCR引物的选择
PCR的引物
怎样设计,
答:
某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响,
选择扩增片段时最好避开二级结构区域.用有关计算机软件可以预测估计mRNA的稳定二级结构
,有助于选择模板.实验表明,待扩区域自由能(△G°)小于58.6lkJ/mol时,扩增往往不能成功.若不能避开这一区域时,用7-deaza-2′-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是...
RT -
PCR
合成cDNA
引物的选择
答:
在进行RT-PCR合成cDNA的过程中,引物的选择至关重要。首先,
对于难以完全拷贝的特定mRNA,可以使用随机六聚体引物
。这种非特异性引物让体系中的所有RNA分子都参与cDNA的第一链合成,PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而,值得注意的是,通常采用随机六聚体合成的cDNA中,约有96%来自rRNA。相比之下,O...
RT-
PCR技术引物的选择
答:
如rRNA、mRNA和tRNA,随机引物是一种适用的选择
,特别适用于单一模板的RT-PCR反应。这类引物的广泛适用性使其能兼容各种类型的RNA,包括那些带有PolyA尾巴的RNA,如真核生物的mRNA和tRNA(原核生物的RNA则不在此列)。
PCR技术
中
选择引物的
条件是什么
答:
⑥ 引物自身不能有连续4个碱基的互补
。⑦ 引物之间不能有连续4个碱基的互补。⑧ 引物5′端可以修饰。⑨ 引物3′端不可修饰。⑩ 引物3′端要避开密码子的第3位
pcr技术
中需要添加的
引物
有几种
答:
5、引物与非特异扩增区的同源性不应超过70%
。引物3′端的8个碱基不能在待扩增区域外有完整的互补序列,否则容易导致非特异性扩增。6、底漆3'端的底座,特别是最后两个底座,应严格匹配。最好的选择是G和C。7、底漆的5'端可以改性。例如,添加限制性酶位点,引入突变位点,用生物素标记,荧光物质,...
根据文献,应该如何
选择
适合的
引物
?
答:
引物是分子
生物学
实验中的关键组分,它们在聚合酶链反应(
PCR
)、DNA测序、克隆以及其他许多技术中发挥着重要作用。选择合适的引物对于实验的成功至关重要。以下是根据文献选择适合的
引物的
一些建议:目标序列
的选择
:首先,需要确定目标DNA序列。这通常是基于研究的目的,例如,如果你正在研究某个特定的基因,...
pcr引物
浓度一般选多少?
答:
一般来说,
PCR引物的
浓度
选择
在0.2-0.5μmol/L之间。在这个范围内,可以确保PCR反应的特异性,避免由于引物浓度过高导致的非特异性扩增。三、引物浓度的影响 1. 若引物浓度过高,可能导致错误引发,增加非特异性产物的生成。2. 若引物浓度过低,则可能降低PCR的敏感性,导致目标产物的产量减少。因此,...
PCR引物
浓度一般选多少
答:
引物
有多种设计方法,由
PCR
在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同
的选择
。模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度...
高中生物 PCR
中 设计
引物
下面 1,2组都不合理 说明理由
答:
第一组引物:引物1和引物2是互补的(这个应该能看出来吧),在
PCR的
时候两者会因为碱基互补配对而形成双链,起不到
引物的
作用;第二组引物:引物1的前面的5个碱基和后面的5个碱基是互补的,会形成发卡结构,起不到引物的作用。
pcr引物
设计时引物位置
的选择
答:
放在目标片段的上下游即可,具体的要看你的后续操作。但有些是要必须考虑的,例如,
PCR引物
不能放在了同源序列、重复序列等影响扩增特异性的区域。希望能帮到你。
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