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重组子筛选的主要方法
系统分析你掌握的几种
重组
阳性克隆
子的筛选
和鉴定
方法
答:
【答案】:(1)根据重组子遗传重组表型改变的筛选法
1)利用抗生素抗性基因进行筛选 2)通过α互补使菌产生颜色来筛选 3)利用报告基因筛选克隆子
(2)根据重组子结构特征的筛选法
1)琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小
2)限制性内切酶分析 3)印迹杂交方法 4)
PCR法
(3)
根据目的基因表达产物采用免疫化学方法
...
影响感受态细胞转化效率的因素有哪
重组子筛选的主要方法
有哪些?
答:
1.影响感受态细胞转化效率的因素主要有温度和催化剂
2.重组子筛选一般方法是标记基因.即在基因片段上插入一段抗生素基因
,然后在含有病菌和核苷酸的培养皿上培养,存活下来的即使符合条件的重组子.3.还有
染色法和人工筛选法
3种基因文库的构建中对
重组子的筛选方法
并简述其原理
答:
1
抗性筛选
。利用培养基中的药物进行筛选。重组子可获得抗性。2
影印筛选
。利用核酸探针对具有目的DNA片段的宿主进行筛选。3
营养缺陷筛选
。宿主是营养缺陷型,重组子可使宿主获得营养补偿能力,从而起到筛选效果。
电泳法筛选重组子的
原理
答:
电泳法筛选重组子的原理是利用电泳技术将基因重组片段从其他DNA片段中分离出来
。根据查询相关公开信息显示,电泳过程中,每个DNA片段在电压作用下在电泳胶中移动,并根据其尺寸大小,分别向正电压方向或负电压方向移动,从而实现对DNA片段的精确分离。
举出3种基因文库的构建中
重组子的筛选方法
并简述其原理
答:
蓝白斑筛选的原理
分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等
。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS)...
dna
重组子的筛选
鉴定有哪些步骤
答:
DNA
重组
技术步骤如下:一、质粒DNA 提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。二、制备重组DNA 在灭菌的1.5mL 离心管中,加入pQE-31质粒10mL(2mg/mL),2mL酶切缓冲液,1mL BamHI 和HindIII酶 的混合液(各含10个单位),无菌双蒸水7mL,至反应混合物总体积为20mL,离心混匀,37℃反应过夜。2. 在另一...
怎样用营养缺陷型
筛选重组子
和非重组子
答:
转化、
筛选
、鉴定。1、将外源DNA片段与载体DNA的连接反应物不经分离直接用于转化,再加上
重组
率和转化率的不理想,因此必须通过筛选和鉴定来区分转化子与非转化子。2、在不含目标营养组分的培养基上,只有转化子才能生长。因此,通过观察菌落在特定培养基上的生长情况,就可以初步判断哪些是转化子。3、...
怎样用营养缺陷型
筛选重组子
与非重组子
答:
该
筛选方法
如下:1、突变型受体细胞上缺乏合成某种必需营养物质,而载体分子上携带了这种营养物质的生物合成基因,利用缺少该营养物质的合成培养基进行涂布培养时,阳性转化子能够长出菌落。2、已经诱变产生的合成Lys的缺陷型菌株为受体细胞,当载体分子上含有Lys合成基因时,转化后利用不含Lys(即Lys-)的...
如何
筛选
真正获得目的基因并能有效表达的
重组子
答:
那这个表达载体就不能表达出抗。
筛选
原则是:在什么受体细胞中表达,就用什么受体受体细胞内的启动子。例如,想用人的乳腺细胞生产出血清白蛋白,那么就到人体内去筛选调控组件,并且把血清白蛋白基因与人的乳腺蛋白基因的启动子终止子等调控组件
重组
在一起,这样就可以顺利构建基因表达载体了。
转化子(transformant )的
筛选
与
重组子的
鉴定
答:
1. 基于载体遗传标记的筛选与鉴定(表型筛选法): 载体表型选择法、插入基因的选择法 抗药性筛选法--抗生素 人工构建的基因工程载体,都带有一个或几个可选择的遗传
标记基因
或决定表型特征的基因,转化后的受体菌可在含有相应抗生素的培养基上正常生长,而不含此载体的DNA的受体菌就不能存活。
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